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背景和目的: 载脂蛋白A-I(apolipoproteinA-I，apoA-I)，是由243个氨基酸编码而成的蛋白，分子量约28kD。apoA-I在肝细胞内合成，并分泌到肝细胞外。在肝细胞外接收由ATP结合盒转运子（ATP-bindingcassettetransporterA1，ABCA1）转运的胆固醇和磷脂。而ABCA1位于肝细胞膜上，负责将肝细胞内的胆固醇和磷脂转运到乏脂的apoA-I上，这些部分脂质化的apoA-I可以在外周细胞中接收更多通过ABCA1转运的胆固醇和磷脂，形成高密度脂蛋白(highdensitylipoprotein，HDL)。HDL中的脂质最终回到肝脏，经过进一步加工代谢，最终以胆汁的方式排出体外。国外对于apoA-I的研究主要在动脉粥样硬化领域，对其在肝脏中的作用仍鲜有研究。非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)是以肝细胞脂肪变性为病理特征而患者无过量饮酒史的一类临床综合征，包括单纯性脂肪肝，非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis，NASH)和肝纤维化/肝硬化等。用蛋氨酸胆碱缺乏(methionineandcholine-deficient，MCD)饲料喂养啮齿类动物诱发NASH模型是目前公认的一种迅速有效的造模方法。在此基础上，本实验将外源的apoA-I基因经股静脉注入NASH小鼠体内，然后检测apoA-I基因表达及其对NASH肝病模型能否有保护作用。此外，用含有油酸(oleicacid,OA)的培养基培养BEL-7402细胞系造成肝细胞水平的NASH的脂质堆积初级阶段，用以细胞水平的机制研究。 实验方法: 1.股静脉注射:将携带有人的apoA-I基因的腺病毒pAdxsi-apoA-I通过股静脉缓慢滴注到C57BL/6J小鼠体内，使其在肝脏中表达。 2.MCD模型制备及指标检测:C57BL/6J小鼠随机分成四组:正常组、MCD模型组、apoA-I治疗组、对照组。从第1周开始，直至第2周每周取材。取肝脏，制成组织冰冻切片，用油红O染色观察肝内脂肪沉积，用生化检测仪检测血清中，谷草转氨酶(alanineaminotransferase，ALT)、谷丙转氨酶(aspartateaminotransferase，AST)、甘油三脂、胆固醇等的水平。以苏木精伊红染色观察肝细胞组织改变。 3.用不饱和脂肪酸油酸处理人肝癌细胞系BEL-7402，诱导肝细胞发生脂肪变性。将荷载apoA-I基因的pcDNA3.0和ABCA1基因的pCMV质粒分别转染入细胞，通过Westernblot检测内质网应激标志蛋白，如葡萄糖调节蛋白78（glucose-regulatedprotein78，GRP78），固醇调节元件结合蛋白1c（sterolregulatoryelementbindingprotein1c，SREBP1c）的表达。 实验结果: 1.股静脉注射携带有绿色荧光蛋白的腺病毒能够在动物体内表达2周以上，但没有组织特异性，绿色荧光蛋白在各主要脏器（心、肺、脾、肾、肝）均有表达。 2.apoA-I的表达能减少MCD引起NASH小鼠肝细胞中的脂滴的形成，血清ALT、AST水平有所下降，肝组织中脂肪酸、甘油三酯和胆固醇含量明显降低，相应的其血清甘油三酯和胆固醇水平升高。 3.对细胞蛋白进行Westernblot用以检测GRP78和SREBP1，在转染pcDNA3.0-apoA-I和pCMV-ABCA1后，GRP78和SREBP1的含量均有所下降，提示apoA-I对NASH的保护作用可能是通过减轻内质网应激而发挥的。 结论: 导入外源apoA-I腺病毒载体后，可在小鼠体内稳定表达apoA-I蛋白，并对MCD造成的NASH起到保护作用，而这种作用有可能是通过ABCA1/apoA-I脂质转运途径和减轻内质网应激而实现的。