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背景卡培他滨是新型氟尿嘧啶类化疗药,因在肿瘤内被激活、口服方便,被广泛用于结肠癌辅助治疗,尤其适合晚期患者。研究发现,卡培他滨可诱导肿瘤细胞凋亡,但其对结肠癌细胞的作用和诱导凋亡的机制尚不清楚。内质网应激是细胞应对各种应激刺激而产生的保护性机制,它既可通过激活一系列信号转导途径促进细胞存活,又可独立诱导凋亡,还能通过调节肿瘤细胞活性影响其抗性产生。内质网应激是否参与了卡培他滨诱导的结肠癌细胞死亡还不是很清楚。目的明确卡培他滨对结肠癌细胞生物学行为的影响,探讨内质网应激在卡培他滨诱导结肠癌细胞死亡中的作用,为临床治疗结肠癌提供新的联合用药的策略。方法1.体外培养人结肠癌RKO、HCT116细胞,运用CCK-8法检测药物处理后的细胞存活率,观察单独使用不同浓度卡培他滨对结肠癌RKO、HCT116细胞存活率的影响,确定卡培他滨对体外结肠癌细胞产生毒性损伤的最佳有效浓度。2.运用Western blotting法检测不同浓度卡培他滨处理后结肠癌RKO、HCT116细胞中凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3表达水平,流式细胞术检测结肠癌RKO细胞凋亡率的改变。3.Western blotting检测不同浓度卡培他滨对内质网应激信号通路蛋白Bip、eIF-2α、p-eIF-2α、CHOP表达的影响。4.CCK-8法检测联合应用卡培他滨和内质网应激激活剂对结肠癌RKO、HCT116细胞存活率的影响。5.运用Western blotting法检测联合应用卡培他滨和内质网应激激活剂后结肠癌RKO、HCT116细胞中凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3表达水平,流式细胞术检测结肠癌RKO细胞凋亡率的改变。结果1.CCK-8检测结果显示,与对照组相比,不同浓度卡培他滨干预组的RKO、HCT116细胞存活率均出现明显降低,并且该效应随卡培他滨浓度增加而显著加强,差异有统计学意义(P<0.05)。2.Western blotting检测结果显示,与对照组相比,不同浓度卡培他滨干预组的凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞术结果显示,不同浓度卡培他滨可以引起结肠癌RKO细胞凋亡率的升高。3.Western blotting检测结果显示,与对照组相比,不同浓度卡培他滨干预组的内质网应激相关蛋白Bip、p-eIF-2α、CHOP的表达均明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.CCK-8检测结果显示,卡培他滨和内质网应激激活剂联合干预组的RKO、HCT116细胞存活率明显低于单独卡培他滨干预组,差异有统计学意义(P<0.05)。5.Western blotting检测结果显示,与单独卡培他滨干预组相比,卡培他滨联合内质网应激激活剂干预组结肠癌细胞中Cleaved caspase-3蛋白的表达进一步增强,差异具有统计学意义(P<0.05);流式细胞术结果显示,联合内质网应激激活剂可以进一步增加卡培他滨引起的凋亡率的升高。结论1.卡培他滨能够降低结肠癌RKO、HCT116细胞存活率,并能诱导结肠癌RKO、HCT116细胞凋亡。2.内质网应激参与了卡培他滨诱导的结肠癌RKO、HCT116细胞凋亡。此作用通过活化内质网跨膜蛋白,经eIF-2α磷酸化途径促进CHOP蛋白的表达,诱导细胞凋亡。3.增强内质网应激能够进一步增加卡培他滨对结肠癌RKO、HCT116细胞的损伤,并且进一步增强卡培他滨诱导的细胞凋亡。