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由于采样和培养条件的限制,深海微生物研究的较少,目前海洋微生物研究主要集中在近海和浅海。而深海特殊的生态环境,使微生物形成了独特的代谢体系,成为新颖化合物的重要来源,具有很好的研究开发前景。本文首次较为系统的研究了深度为1758-3600m南海海底沉积物中深海微生物的分离和活性菌株的筛选情况,旨在为探索我国南海深海微生物资源提供一定的科学依据。
采用多种分离培养基从6个不同深度(1758、2620、3200、3500、3587和3600m)的南海深海沉积物样品中,分离到225株深海微生物,包括40株放线菌和185株细菌。以分离得到的225株深海微生物为研究对象,从产蛋白酶、抗真菌、杀虫三个方面进行活性菌株的筛选,研究南海深海沉积物中的微生物资源状况:
(1).将分离到的225株深海微生物,同时在10℃、28℃、45℃三个温度下进行产低温蛋白酶、中温蛋白酶、高温蛋白酶的筛选。初筛结果表明:这225株深海微生物大都有大小不同的产蛋白酶能力。10℃有产蛋白酶的有109株,28℃产蛋白酶的有160株,45℃产蛋白酶的有117株。筛选到一株在45℃下有较强产蛋白酶能力的菌株B1394,其酶活可达873U/ml,有一定的应用前景。通过形态观察、生理生化测定、16SrDNA序列测定,将B1394定名为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。其粗酶液性质研究发现:最适酶活温度60℃,最适pH8.0,40℃、50℃和60℃热稳定性较好,Mn2+、Mg+、Ca2+对该蛋白酶有激活作用,Hg2+、Fe3+、Cu2+、Zn2+、Fe2+对其有抑制作用,苯甲基磺酰氟(PMSF)几乎完全抑制其活性,推断为丝氨酸蛋白酶。
(2).对其中100株深海细菌和40株深海放线菌,以立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)和白色念珠菌(Candidaalbicans)为靶菌进行了抗真菌活性的筛选。初筛结果表明:分别有37株和35株深海细菌对立枯丝核菌和白色念珠菌有抑菌活性,分别占被检测细菌数目的37%和35%;有18株深海放线菌对立枯丝核菌有抑制作用,占被检测放线菌总数的45%。筛选到一株有较强抗真菌活性的深海放线菌SHA6,其发酵液对包括尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)在内的10种植物病原菌有明显的抑制作用。对其发酵液的理化性质进行初步研究发现SHA6发酵液具有良好的热稳定性和酸碱稳定性,对SHA6进行分子生物学鉴定后将其初步定名为橙色单胞菌(Aurantimonasaltamirensis)。
(3).以卤虫为初步筛选模型,对其中的20株深海放线菌进行了杀虫方面的筛选,结果发现有5个深海放线菌菌株表现有较强的杀虫活性。其中深海放线菌SHA4发酵液的乙酸乙脂提取物杀卤虫的活性最强,在浓度为100μg/ml时杀卤虫活性为83%,而在浓度400ppm时,48h可以杀死38%的甜菜夜娥。对SHA4进行分子生物学鉴定后将其初步定为拟诺卡氏菌(Nocardiopsissp)。
本论文为南海深海沉积物中微生物资源的初步研究结果,为进一步的研究奠定了基础。