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游离脂肪酸(FFAs)是中性脂肪分解的一种产物，是生物体内热量的直接来源(即在肌肉活动所需能源肝糖耗尽后，脂肪组织分解中性脂肪成游离脂肪酸，作为后能源使用)，维持长时间活动所需的物质，也是导致氧化应激的物质之一。游离脂肪酸大部分与白蛋白结合，存在于血液中，血清中所含内源性游离脂肪酸的浓度与生物脂类代谢、糖代谢及内分泌功能有着密不可分的关系。若脂质代谢异常，使血脂含量过高，导致动脉粥样硬化、冠心病等严重危害生命体健康的疾病，都属于高脂血症。因此高脂血症与脂质代谢有着密不可分的关系。
实验目的：建立血清中游离脂肪酸气质联用(GC-MS)定量分析方法，优化GC-MS技术分析条件并进行方法学验证，探讨小鼠、金黄地鼠血清26种FFAs含量与高脂血症之间的相关性及辛伐他汀对其的干预作用，为临床相关疾病研究提供一定的科学数据和方法。
研究方法与内容：
1.气质联用技术测定游离脂肪酸含量分析方法的条件优化。
2.测定血清游离脂肪酸含量分析方法的方法学验证。
3.分组试验动物，建造高脂血症模型，28天后取眼眶血，分离出血清，测定小鼠、金黄地鼠的正常组、模型组和阳性给药组血清样本FFAs的含量,探讨小鼠、金黄地鼠血清中游离脂肪酸含量与高脂血症的关系。
主要通过样品制备、色谱分离条件、质谱检测参数等方面的条件优化及方法学验证建立，来验证FFAs的GC-MS含量测定分析方法。采用血清衍生化方法解决了目标化合物不稳定的问题：水解、甲酯化等，是目前最常见的脂肪酸衍生化前处理方法，而甲酯化可将FFAs的-COOH酯化成-COCH3，降低其极性，减少脂肪酸不稳定性，并促进不饱和异构体的分离，因此是测量血清FAs最佳的样品处理方法之一。
根据2020版《中华人民共和国药典》对生物样品分析方法验证法规的要求，本研究对定量分析方法的线性范围、定量下限、精密度、准确度、稳定性、残留效应、基质效应、加标回收率等项目进行了相关考察。
并对SPF级小鼠及金黄地鼠血清FFAs进行定量分析，对正常组、高脂血症模型组、辛伐他汀给药组三组间FFAs含量进行比较，探究其结果及鼠种与高脂血症的关系。
结果与结论：
1.优化进样量为2.0μL，分流比1∶1，溶剂延迟时间2.9min，离子源电压70eV，扫描模式及范围为全扫模式、35-450m/z，调整目标化合物个数为26个。
2.用优化好的GC-MS测量血清中FFAs含量的分析方法，成功通过生物样本方法学验证。标准曲线线性良好，R值两个9，线性范围是0.1000-1000ng/mL，日内日间精密度(RSD%≤13.99%)和准确度(relative error：85%-115%)，残留效应小，基质效应小，加样回收率范围在85.57%-115.18%内，在4℃和25℃四小时内稳定性良好。
3.小鼠、金黄地鼠血清中FFAs的含量与高脂血症发展进程密切相关，辛伐他汀对血清中FFAs含量有显著干预作用。
本文在样品制备过程中，通过甲酯化衍生处理血清样本，使游离脂肪酸转化成脂肪酸甲酯，增加其稳定性，使得在气质仪器中能够显示出碎片离子图谱，为以后生物样本处理提供参考；本文建立了快速、灵敏、可靠的血清中26种游离脂肪酸含量测定的生物分析方法，检测了两种实验动物鼠血清中26种游离脂肪酸含量，发现了各种脂肪酸含量与高脂血症的关系，发现高脂血症与鼠种的密切相关性。在小鼠中发现了辛伐他汀对血清中13种FFAs含量具有显著的回调作用，对血清中1种FFAs含量具有显著的改善作用，为脂代谢相关疾病的早期检测及预后评估，尤其是高脂血症相关疾病的研究提供了一定的科学依据。且在文献总结中，发现缺乏大面积FFAs种类定量分析，也没有鼠种间血清FFAs相比较的文献，因此本文通过试验研究涉足这未知领域，给该方面研究提供思路及方向。
实验目的：建立血清中游离脂肪酸气质联用(GC-MS)定量分析方法，优化GC-MS技术分析条件并进行方法学验证，探讨小鼠、金黄地鼠血清26种FFAs含量与高脂血症之间的相关性及辛伐他汀对其的干预作用，为临床相关疾病研究提供一定的科学数据和方法。
研究方法与内容：
1.气质联用技术测定游离脂肪酸含量分析方法的条件优化。
2.测定血清游离脂肪酸含量分析方法的方法学验证。
3.分组试验动物，建造高脂血症模型，28天后取眼眶血，分离出血清，测定小鼠、金黄地鼠的正常组、模型组和阳性给药组血清样本FFAs的含量,探讨小鼠、金黄地鼠血清中游离脂肪酸含量与高脂血症的关系。
主要通过样品制备、色谱分离条件、质谱检测参数等方面的条件优化及方法学验证建立，来验证FFAs的GC-MS含量测定分析方法。采用血清衍生化方法解决了目标化合物不稳定的问题：水解、甲酯化等，是目前最常见的脂肪酸衍生化前处理方法，而甲酯化可将FFAs的-COOH酯化成-COCH3，降低其极性，减少脂肪酸不稳定性，并促进不饱和异构体的分离，因此是测量血清FAs最佳的样品处理方法之一。
根据2020版《中华人民共和国药典》对生物样品分析方法验证法规的要求，本研究对定量分析方法的线性范围、定量下限、精密度、准确度、稳定性、残留效应、基质效应、加标回收率等项目进行了相关考察。
并对SPF级小鼠及金黄地鼠血清FFAs进行定量分析，对正常组、高脂血症模型组、辛伐他汀给药组三组间FFAs含量进行比较，探究其结果及鼠种与高脂血症的关系。
结果与结论：
1.优化进样量为2.0μL，分流比1∶1，溶剂延迟时间2.9min，离子源电压70eV，扫描模式及范围为全扫模式、35-450m/z，调整目标化合物个数为26个。
2.用优化好的GC-MS测量血清中FFAs含量的分析方法，成功通过生物样本方法学验证。标准曲线线性良好，R值两个9，线性范围是0.1000-1000ng/mL，日内日间精密度(RSD%≤13.99%)和准确度(relative error：85%-115%)，残留效应小，基质效应小，加样回收率范围在85.57%-115.18%内，在4℃和25℃四小时内稳定性良好。
3.小鼠、金黄地鼠血清中FFAs的含量与高脂血症发展进程密切相关，辛伐他汀对血清中FFAs含量有显著干预作用。
本文在样品制备过程中，通过甲酯化衍生处理血清样本，使游离脂肪酸转化成脂肪酸甲酯，增加其稳定性，使得在气质仪器中能够显示出碎片离子图谱，为以后生物样本处理提供参考；本文建立了快速、灵敏、可靠的血清中26种游离脂肪酸含量测定的生物分析方法，检测了两种实验动物鼠血清中26种游离脂肪酸含量，发现了各种脂肪酸含量与高脂血症的关系，发现高脂血症与鼠种的密切相关性。在小鼠中发现了辛伐他汀对血清中13种FFAs含量具有显著的回调作用，对血清中1种FFAs含量具有显著的改善作用，为脂代谢相关疾病的早期检测及预后评估，尤其是高脂血症相关疾病的研究提供了一定的科学依据。且在文献总结中，发现缺乏大面积FFAs种类定量分析，也没有鼠种间血清FFAs相比较的文献，因此本文通过试验研究涉足这未知领域，给该方面研究提供思路及方向。