新疆辣椒和茄子上两种病毒的分子鉴定

来源 :石河子大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:nextronnpf
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辣椒是新疆重要的经济作物,病毒病的不断发生是影响辣椒生产的重要因素。为了明确引起石河子地区辣椒表现茎干及顶端坏死症状的病原种类,利用蚕豆病毒属(Fabavirus)的兼并引物,通过RT-PCR对采自石河子表现茎干及顶端坏死的辣椒样品进行了分子检测。结果显示所有感病样品均获得大小400bp的特异性条带。选取分离物XJP1-1的RT-PCR产物进行克隆和测序,获得389个核苷酸序列,基因库检索表明,该序列与蚕豆萎蔫病毒2(BBWV2)基因组RNA1组分5,末端序列同源性很高,达到95.8%~99.2%。由此表明,感病辣椒被蚕豆萎蔫病毒2(BBWV2)侵染。根据已测序列及基因库中登录的序列,在保守区设计了5对引物对分离物XJP1-1基因组RNA1进行分段扩增。获得RNA1全长为5958个核苷酸(KC790225),与其它BBWV2的RNA1具有高的序列同源性,为95.8%~99.2%。根据基因库中登录的序列,又设计了4对引物对分离物XJP1-1基因组RNA2进行分段扩增。获得RNA2全长为3616个核苷酸(HQ283390),与其它BBWV2的RNA2具有高的序列同源性,为79.3%~88.0%。5,-NCR序列比对结果表明,分离物XJP1-1基因组RNA2与RNA1在5′-NCR区具有高的序列同源性为73.8%,并且包含相同的重复序列(AAACAGCUUUC)和相似的重复位置。茄子是不易被病毒感染的寄主,一直被认为是番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)的非寄主。但是2011年下半年,新疆喀什地区温室茄子发生严重的曲叶等症状,与双生病毒危害的症状非常相似。为了明确其病原种类,利用双生病毒的兼并引物PA/PB,对采自感病茄子的病毒分离物KSQ1-3进行了分子检测。通过PCR检测获得大小约500bp的特异性条带,对其进行克隆和测序,获得518个核苷酸。基因库检索表明,该序列与番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)基因组DNA-A序列同源性很高。根据已测序列设计了2对引物对KSQ1-3DNA全长进行了的克隆和测序,获得基因组DNA的全长为2781个核苷酸,序列比对结果显示,该序列与番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)具有最高的序列相似性,达到98.5%~99.6%。本研究为首次发现番茄黄化曲叶病毒可以侵染茄子及茄子是TYLCV的自然寄主。
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