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目的自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis,AIH)是一种病因不明的肝脏慢性炎症性疾病。临床上对AIH的治疗主要是使用糖皮质激素,其可单独使用,效果不明显的话则需要与免疫抑制剂如硫唑嘌呤联合应用,但这种治疗方案的完全缓解率并不高,且长期服药存在较多副作用,因此迫切需要寻找和探讨新的有效治疗方法。骨髓间充质干细胞(Bone-marrow-derived mesenchymal stem cells,BMMSCs)是来源于骨髓中的一种多能干细胞,具有多方向分化的潜能及强大的免疫调节作用,大量动物实验和临床研究证实BMMSCs对多种自身免疫性疾病都有很好的治疗作用。本研究应用小鼠BMMSCs干预刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠AIH进程,一方面进一步证实了BMMSCs的治疗效果,另一方面通过分析小鼠脾脏中CD4+T淋巴细胞的活化和亚群比例变化,深入探讨BMMSCs发挥免疫抑制作用治疗AIH的机制,为BMMSCs在临床上的应用提供一些可能的实验依据。方法经C57BL/6小鼠尾静脉注射相应量的ConA以建立AIH模型小鼠。从三周龄C57BL/6小鼠的骨髓中体外分离培养BMMSCs并鉴定其表面标记分子和成脂成骨分化能力。C57BL/6小鼠随机分为三组:MSC治疗组,AHI模型小鼠经尾静脉注入MSCs;磷酸盐缓冲液(PBS)治疗组,AHI模型小鼠经尾静脉注入PBS以及正常对照组,每组5只。14-16小时后拉颈处死小鼠。检测外周血ALT、AST,进行肝脏knodell评分。取小鼠脾脏制成细胞悬液并用流式细胞分析术检测CD4+T淋巴细胞活化比例及CD4+T淋巴细胞中Treg、Th1、Th2和Th17细胞比例变化情况,并计算Th17/Treg比值。ELISA检测外周血中TNF-α、IFN-γ及IL-4细胞因子的水平。用q-PCR验证肝脏中CD4+淋巴细胞亚群比例变化。应用独立样本t检验比较两组正态分布资料间的差异。结果1.bmmscs表面特异性抗原cd44、cd29、sca-1均为阳性,而cd45、cd11b、cd31为阴性,茜素红染色、油红0染色均呈阳性,均符合bmmscs的特征。2.aih模型小鼠的alt、ast以及knodell评分均较正常对照组均明显升高,差异均具有统计学意义(p<0.05)。但是,msc治疗组的alt、ast以及knodell评分均优于pbs治疗组,差异均具有统计学意义(p<0.05)。3.与正常对照组相比,pbs治疗组脾脏中cd4+t淋巴细胞活化比例,cd4+t淋巴细胞中th1、th2细胞所占比例及其外周血中细胞因子(tnf-α、ifn-γ及il-4)水平,th17/treg比值均显著升高,以上差异均具有统计学意义(p<0.01)。4.经mscs治疗后,msc治疗组与pbs治疗组比较,脾脏cd4+t淋巴细胞活化比例无差异(p=0.95),但cd4+t淋巴细胞中th1、th2细胞所占比例及其分泌到外周血中的细胞因子(tnf-α、ifn-γ及il-4)水平,th17/treg比值均显著降低,以上差异均具有统计学意义(p<0.01)。msc治疗组脾脏中th17/treg比值与正常组无差别(p=0.24)。5.肝脏内cd4+t淋巴细胞亚群比例变化趋势跟脾脏内的变化趋势相同。与正常组比较,pbs治疗组肝脏中th1、th2、th17细胞比例均有明显升高趋势,treg亦有升高。与pbs治疗组相比,msc治疗组肝脏中th1、th2、th17细胞比例呈明显下降趋势,但treg上升趋势明显。结论1.采用全骨髓贴壁法得到的小鼠bmmscs具有成脂、成骨能力且表面标记均符合。2.bmmscs对cona诱发的小鼠肝脏损伤具有治疗作用。3.bmmscs不能抑制cona对脾脏中cd4+t淋巴细胞的激活。4.BMMSCs通过影响脾脏CD4+T淋巴细胞亚群,一方面降低Th1、Th2细胞比例导致其分泌的外周血中相应细胞因子(TNF-α、IFN-γ及IL-4)水平下降;另一方面升高Treg比例,降低Th17细胞比例,维持Th17/Treg平衡,进而起到治疗ConA诱导的小鼠急性免疫性肝损伤的作用。5.肝脏中CD4+T淋巴细胞亚群的变化趋势跟脾脏中基本一致。