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我们在前期的研究中采用实体瘤染色体直接制备法发现原发性胃癌中染色体7q-的缺失率最高，其共同的缺失片断是7q32-qter。进一步采用显微切割法研究发现微卫星多态性位点D7S486在原发性胃癌中杂合性丢失的频率高达30.36％，并且D7S486杂合性丢失与临床分期和淋巴结转移相关，据此我们推测这个区域可能含有与胃癌相关的抑癌基因。
在此基础上，本研究利用单核苷酸多态性(SNP)标志和基因芯片技术，采用一条新的技术路线进行D7S486位点附近胃癌相关抑癌基因的筛选和鉴定。首先，从人类基因组数据库中在D7S486位点附近选择所有21个已知基因和14个表达序列标志，在其内部或上下游3000bp范围内选择了309个SNP；根据SNP设计探针和引物，制作出SNP芯片。在经过两次多重PCR反应后在同一芯片上对105例原发性胃癌中所有SNP进行杂合性缺失(LOH)检测，并采用测序的方法对芯片实验结果进行验证。根据LOH检测结果，初步筛选鉴定出胃癌相关基因后，在原发性胃癌组织内检测该基因的表达和甲基化状态，进一步验证该基因与胃癌的相关性。
结果如下：
1.本研究采用的基于单碱基延伸原理的SNP基因分型技术结果可靠，用测序方法进行验证，在Cy3／Cy5强度阈值设定为±2.0时，其准确率可达96.7％(29／30)，仅1例将纯合子错判为杂合子。在检测的105例原发性胃癌所有SNP位点中，有信息的SNP位点达92.5％(30012／32445)。结果表明我们的SNP芯片技术准确性高、敏感性好。 2.通过D7S486附近所有基因和EST内部309个SNP位点的LOH研究，在未经显微切割的65例原发性胃癌患者中，有12个SNP在癌组织中LOH频率在10％以上，其中LOH频率最高者为rs733154(23.5％)，其次为rs153951(20.0％)，其余位点LOH频率均不超过20％。进一步显微切割后检测105例原发性胃癌，得到1.0H频率大于15％的12个SNP位点，与未进行显微切割时比较，有两个SNP位点重合，但LOH频率提高(rs11543742：11.8％vs21.2％；rs10273599：23.5％ vs 32.4％)，频率大于30％的SNP位点所对应的已知基因分别为FOXP2(rs6980093，45.8％)、ST7(rs193573，35.4％)、MDFIC(rs2594458，33.3％)、CAV1(rs6466587，30.4％)和TES(rs1881.287，30.4％)。同时，还筛选出两个SNP-rs6466550和rs10267413，LOB频率分别为31.4％和28.3％，分别位于unigeneHs.571242和Hs．149763内。
3.通过检索分析，筛选出了胃癌相关候选抑癌基因TES，研究发现该基因在原发胃癌中表达下调，并且与病理组织类型和预后相关。对该基因启动子区进行甲基化检测，30例原发胃癌中有18例为完全甲基化、4例呈部分甲基化、8例无甲基化；胃癌细胞株MGC803、HGC27呈完全甲基化，5GC7901则无甲基化。用10 μmolL 5’-aza-dC处理MGC803、HGC27后，TES启动子区甲基化逆转，使该基因恢复表达。
本研究建立了一个经济实用的高通量SNP基因分型平台，筛选出胃癌相关抑制基因TES，发现该基因在原发性胃癌中表达显著下调，并且与组织病理类型和预后相关，同时证明启动子区超甲基化是该基因在原发性胃癌中表达下调的原因之一，提示TES可能与胃癌发生发展密切相关。另外，筛选出两个LOH频率在30％左右、位于unigene内的SNP，unigene的意义在于每一个Cluster代表了一个特定的基因，这种信息比EST库所提供的信息更有效率，从而为后续的原发性胃癌易感基因研究中的连锁和关联分析奠定了基础。
原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率高，术后复发率高。肝动脉栓塞化疗术(transcatheter arterial chemoembelization，TACE)联合射频消融术(radiofrequency ablation，RFA)已被证明为有效的治疗肝癌的手段。但由于肝癌的多中心性起源及易于发生肝内转移，即使联合应用了TACE和RFA，肝癌患者的预后仍然不佳。CIK细胞过继性免疫治疗能有效地提高肿瘤患者免疫力、杀伤肿瘤细胞，因此本研究将微创手术和CIK过继免疫治疗结合起来，在TACE联合RFA治疗杀死影像学上可见的肿瘤病灶后，继而通过肝动脉输注CIK细胞，观察其临床效果，为建立一种治疗原发性肝癌的新模式提供依据。
在TACE联合RFA治疗后，85名原发肝癌患者被随机分为CIK细胞治疗组和对照组，治疗组抽取外周血进行CIK细胞制备，在体外检测CIK细胞的细胞因子分泌情况和对肿瘤细胞的杀伤能力。然后通过肝动脉回输自体CIK细胞6-8次，比较治疗前后外周血淋巴细胞亚群变化。并对患者复发情况进行随访，比较治疗组和对照组复发状况。
结果如下：
1.在体外，71.8±5.2％CIK细胞能检测到IFN-γ分泌，但不分泌IL-4；CIK细胞在体外对肝癌细胞系HepG2、HuH-7、SK-Hep1和人白血病细胞系K562有显著的杀伤作用(P<0.01)，并且随着效靶比增大，杀伤作用增强，在同样作用4h的情况下，不同效靶比的杀伤率有统计学差异(P<0.05)。
2.治疗组45例肝癌病例中，CIK过继性细胞治疗能够改善肝癌患者的免疫功能，表现为外周血T淋巴细胞亚群的变化：CD3+、CD4+、CD56+、CD3+CD56+淋巴细胞比例分别由输注CIK细胞前的68.6±11.096、31.1±9.0％、15.6±7.9％、5.2±3.1％增加至输注后的70.7±10.1％(P=0.036)、33.5±8.0％(P=0.001)、18.4±9.4％(P=0.000)，5.9±2.896(P=0.002)；CD4+／CD8+比例由输注前的1.1±0.5上升至输注后的1.3±0.7(P=0.002)。相反，CD8+淋巴细胞比例由31.1±7.8％下降至28.6±8.3％(P=0.015)。
3.在所有85例肝癌患者中，复发者外周血中CD4+、CD56+、CD3+D56+细胞比例较未复发者低，分别为66.9±8.8％ vs 69.6±10.2％(P=0.002)，17.4±7.1％ vs 21.6±8.5％(P=0.025)，5.2±2.3％ vs 6.7±3.0％(P=0.028)；复发病例CD4+／CD8+比例也较来复发者低，为1.0±0.3 vs 1.2±0.5(P=0.001，)。相反，复发者CD8+细胞比例则较未复发者高，为33.8±8.1％ vs 28.6±7.1％(P=0.009)。 4.CIK细胞治疗组共有14例复发，占31.1％(14／45)，面对照组则有32例出现复发，占80.096(32／40)。CIK细胞治疗组复发率显著低于对照组(P=0.001)。生存分析表明，CIK细胞治疗组患者无复发生存期较对照组延长，两组无复发生存期中位数分别为16.8±0.7月及15.0±0.8月(P=0.012)。
结果表明，患者的免疫状态对肿瘤的复发具有重要作用，TACE联合RFA减低原发性肝癌的肿瘤负荷后，序贯进行CIK过继性免疫治疗是一种能够改善肝癌患者免疫功能，抑制肝癌复发的有效方法。