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目的:探讨芦荟多糖通过VEGFR-2介导Ras信号通路调控血管内皮细胞增殖以及促进小鼠深Ⅱ度创面愈合的作用机制。方法:1体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)随机分为两组-芦荟多糖组和对照组,芦荟多糖组为HUVEC分别经100,200和400mg/L浓度芦荟多糖作用,未经芦荟多糖作用为对照组。MTT法检测各组细胞增殖状况,倒置显微镜观察细胞形态学改变;流式细胞技术检测细胞周期;AO-EB染色法检测芦荟多糖对细胞毒副作用;LDH漏出率检测芦荟多糖对细胞损伤程度。2芦荟多糖组和对照组HUVECs进行逐级信号阻断:⑴加入SU5416半数抑制剂量(IC50)阻断VEGFR-2;⑵加入U73122完全阻断PLC-γ后,用FPP IC50阻断Ras;⑶以不加抑制剂作为抑制剂对照组。MTT法检测各组细胞增殖状况,ELISA法检测培养上清液中VEGF和VEGFR-2水平,Western Blot法检测细胞中VEGFR-2、Ras、Raf以及Ras和Raf磷酸化蛋白的表达。3 150只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组(n=6)和实验组(n=144),实验组小鼠于背部制作直径2cm深Ⅱ度烫伤模型,并随机细分为四个处理组(每个处理组36只),创面分别用0.5%芦荟多糖霜、SD-Ag霜、基质霜和生理盐水处理,观察创面愈合情况,并于伤后1,3,7,10,14和21d取创面组织,应用ELISA法检测VEGF和VEGFR-2水平。结果:1 MTT检测结果显示芦荟多糖作用后HUVEC增殖与对照组比较均较为活跃,并于第5天达峰值;倒置相差显微镜观察细胞形态无明显改变;芦荟多糖作用后G0/G1期细胞所占百分率显著下降,而G2/M期和S期细胞所占百分率显著上升(P<0.01);AO-EB染色结果未发现凋亡或死亡细胞;各组LDH漏出率也无明显改变。2⑴与对照组比较,200和400mg/L芦荟多糖组培养上清液中VEGF水平显著上升(P<0.05-0.01),细胞Ras磷酸化蛋白表达明显增强(P<0.05);100,200和400mg/L芦荟多糖组VEGFR、Ras和Raf蛋白表达也明显增强(P<0.05-0.01)。⑵与不加抑制剂的芦荟多糖组和对照组比较,加入IC50 SU5416作用48h后相对应各组HUVEC增殖明显下降,培养上清液中VEGF水平显著上升(P<0.05-0.01),细胞VEGFR-2、Ras和Ras磷酸化蛋白表达均显著下降(P<0.05-0.01);但与抑制剂对照组比较,200和400mg/L芦荟多糖组细胞增殖明显上升(P<0.01);100,200和400mg/L芦荟多糖组培养上清液中VEGF水平显著上升(P<0.05),而VEGFR-2水平只有200mg/L芦荟多糖组差异具有显著性意义(P<0.05);100,200和400mg/L芦荟多糖组细胞VEGFR-2蛋白表达明显增强(P<0.05-0.01),200和400mg/L芦荟多糖组细胞Ras和Ras磷酸化蛋白表达明显增强(P<0.05)。⑶与不加抑制剂的芦荟多糖组和对照组比较,加入IC50 FPP作用48h后相对应各组细胞增殖明显下降(P<0.01),细胞Ras、Raf及其磷酸化蛋白表达均显著下降(P<0.05-0.01);但与抑制剂对照组比较,200和400mg/L芦荟多糖组细胞增殖明显上升(P<0.01);100,200和400mg/L芦荟多糖组细胞Ras、和Raf蛋白表达明显增强(P<0.01),它们磷酸化蛋白呈上升趋势。3与SD-Ag组、基质组和生理盐水组比较,芦荟多糖组伤后10、14和21d创面愈合明显增快(P<0.05)。芦荟多糖组伤后1、3、7和21d创面组织中VEGF水平与生理盐水组比较显著增加(P<0.05-0.01);而与SD-Ag组和基质组比较,芦荟多糖组伤后3、7和21d创面组织中VEGF水平也显著性上升(P<0.05-0.01)。芦荟多糖组伤后7、10、14和21d创面组织中VEGFR-2水平与生理盐水组比较显著增加,而与SD-Ag组和基质组比较,芦荟多糖组伤后14和21d创面组织中VEGFR-2水平呈显著性增加(P<0.05-0.01)。结论:芦荟多糖能促进血管内皮细胞增殖,且无毒性,它促进血管内皮细胞分泌VEGF,并增强由VEGFR-2介导Ras信号通路中VEGFR-2、Ras、Raf和Ras磷酸化蛋白表达,从而促进血管内皮细胞增殖。动物实验证实芦荟多糖促进深Ⅱ度烫伤小鼠创面组织产生VEGF,并能增强创面组织中VEGFR-2表达,加速创面愈合。本研究结果表明芦荟多糖在由VEGFR-2介导Ras信号通路调控血管内皮细胞增殖的创面愈合过程中起重要作用。