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背景:随着过去十几年社会工业化的进程,过敏性疾病的发生率也呈现出了上升的趋势。芒果是一种重要的水果过敏原,食用、接触芒果及其深加工产品都可能使过敏患者产生皮炎、口腔过敏综合征、哮喘等严重的过敏反应。截止目前,大多数相关的研究文献还只是限于对病例的报道、病人血清IgE与芒果粗提蛋白的反应性及交叉过敏的探究上,对芒果果实中蛋白质类过敏原及其致敏机制的了解还十分匮乏。开展相关的研究工作,将为芒果过敏的精确诊断与治疗提供依据。目的:(1)通过建立小鼠模型,探究芒果的致敏机制;(2)鉴定新的芒果过敏原,并对其免疫原性、抗原表位及分子结构特征进行探究。方法:1)芒果致敏Balb/c小鼠过敏性气道炎症模型的建立将12只6-8周龄雌性Balb/c小鼠随机分为两组,模型组:在第0、3、7天腹腔注射150μl包含20μg芒果果实粗提蛋白(MCEP)+2 mg明矾佐剂的生理盐水致敏,在第14、16、18、20天滴鼻50μg MCEP(20μl)进行激发,对照组以相同体积的生理盐水代替MCEP,第21天时处理小鼠。收集小鼠血清、肺泡灌洗液(BALF)以及脾细胞培养上清,检测特异性抗体(IgE、IgG1)、细胞因子(IL-4、IFN-γ、IL-5、TSLP、TNF-α、IL-17A)以及肺部组织病理变化等指标对模型进行评价。2)芒果新主要过敏原几丁质酶的克隆表达及免疫学鉴定以芒果过敏病人血清为一抗,对芒果果实粗提蛋白进行western blot实验,质谱鉴定IgE反应条带。合成基因并构建重组质粒,在大肠杆菌中诱导表达。使用芒果过敏血清对重组几丁质酶的免疫原性及表位进行鉴定。结果:1)芒果致敏Balb/c小鼠过敏性气道炎症模型的建立以正常组小鼠作为对照,模型组小鼠肺部有明显炎症且支气管粘液分泌增加;BALF中嗜酸性粒细胞增多(p<0.001),IL-4、IL-17A显著升高(p<0.01),TSLP也显著升高(p<0.001);血清中特异性IgE及mMCP-1显著升高(p<0.05);脾细胞上清中IL-4、TNF-α水平显著性增高(p<0.01),IFN-γ水平降低(p<0.001)。2)芒果新主要过敏原几丁质酶的克隆表达及免疫学鉴定发现几丁质酶(GenBank:ACD69683.1)为芒果30 kD条带过敏原蛋白,并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导并纯化出了6His-mango chitinase及MBP-mango chitinase融合蛋白。Western blot验证重组6His-mango chitinase具有良好的免疫原性(过敏患者血清:76%阳性),根据国际过敏原命名规则将其命名为Man i 2。Dot blot验证8-28 aa为主要线性IgE结合表位。结论:(1)本研究成功建立了芒果果实过敏动物模型,证实芒果粗提蛋白能够诱导小鼠体内的I型过敏反应及Th2型细胞因子的分泌。(2)鉴定出几丁质酶为芒果新主要过敏原,并命名为Man i 2。