Avastin对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

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目的:  评价Avastin(贝伐单抗)在体外对翼状胬肉成纤维细胞干预后,对细胞增殖以及细胞迁移、侵袭能力的影响,评价其细胞毒性及周期蛋白CyclinD1、凋亡蛋白Caspase3的表达情况,探讨Avastin对翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响及作用机制,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。  方法:  1.无菌手术室取患者翼状胬肉组织,采用组织块贴壁培养法原代培养人翼状胬肉成纤维细胞,用胰酶消化法进行提纯及传代。  2.通过不同浓度Avastin(0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.5mg/ml)处理人翼状胬肉成纤维细胞12h、24h、48h、72h,观察成纤维细胞的增殖、迁移、侵袭情况、药物引起的细胞毒性以及细胞周期蛋白CyclinD1、p-CyclinD1和凋亡蛋白Caspase3的表达。通过WST-1法检测细胞增殖,划痕实验和Transwell实验观察其迁移、侵袭能力,检测LDH释放率评价细胞毒性,Western blot方法检测增殖蛋白以及凋亡蛋白的表达。  结果:  1.WST-1法检测示与处理时间12h相比,低浓度Avastin(0.25mg/ml、0.5mg/ml)作用24h、48h、72h后细胞增殖抑制率无明显提高(P>0.05),高浓度(1.5mg/ml、2.5mg/ml)作用48h、72h后细胞增殖抑制率明显提高(P<0.05);与处理浓度  0.25mg/ml相比,浓度0.5mg/ml在各个时间点细胞增殖抑制率无明显提高  (P>0.05),高浓度(1.5mg/ml、2.5mg/ml)在各个时间点抑制率均明显提高(P<0.05)。  2.2.5mg/ml Avastin可明显抑制翼状胬肉成纤维细胞的侵袭及迁移能力,与对照组相比其细胞迁移速度明显减慢(P<0.05),侵袭数量明显下降(P<0.05)。  3.Avastin对翼状胬肉成纤维细胞无明显细胞毒性,各浓度组及不同时间组的LDH释放率与最大释放率比较均有统计学意义(P<0.05),各实验组之间均无统计学意义(P>0.05)。  4.Avastin可抑制p-CyclinD1表达,可以促进Caspase3的表达,与对照组相比均具有统计学意义(P<0.05),对总CyclinD1表达没有影响,与对照组相比无统计学意义(P>0.05)。  结论:  Avastin可以通过抑制p-CyclinD1以及促进Caspase3的表达抑制翼状胬肉成纤维细胞的增殖,并且可以抑制其迁移及侵袭能力,无明显细胞毒性,进一步证实了该药物的安全有效性。
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