根尖牙乳头干细胞细胞膜片构建及其生物学特性研究

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目的:以组织工程技术为基础的牙髓再生为年轻恒牙感染牙髓的治疗提供了新的方向。细胞膜片技术主要通过刺激细胞外基质的合成使细胞排列紧密形成膜片状结构。在细胞膜片中,细胞间富含细胞外基质、粘附蛋白等,有利于细胞发挥生物学特性。本课题拟在对根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)分离、培养与鉴定的基础上,构建SCAP细胞膜片,并对其组织学形态和生物学性能进行研究,为SCAP细胞膜片应用于年轻恒牙牙髓再生提供实验基础。  研究方法:分离年轻恒牙第三磨牙牙乳头进行SCAP原代培养,采用流式细胞术检测SCAP表面标记物,茜素红S染色检测其成骨/成牙本质分化。取第3代SCAP,细胞膜片诱导液培养14天,形成细胞膜片。对SCAP细胞膜片进行HE染色,组织学观察;流式细胞术检测SCAP细胞膜片细胞周期的变化。实时定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测细胞膜片中Runx2、ALP、Col-Ⅰ基因表达;Western Blot检测细胞膜片Runx2、ALP蛋白表达水平。实验结果用SPSS17.0软件包进行分析,两样本细胞周期检测均数比较用t检验;qRT-PCR基因检测均数比较用Wilcoxon秩和检验,P<0.05为差异具有统计学意义。  结果:HE染色组织学显示SCAP细胞膜片由5-6层细胞组成,细胞量大,细胞之间排列紧密,且富含细胞外基质。SCAP细胞膜片细胞周期G2+S期所占比例较低,而G1期比例较高,提示SCAP细胞膜片增殖性能受到抑制,而分化性能显著增强(P<0.05)。同时,qRT-PCR和Western Blot结果显示,与SCAP相比,SCAP细胞膜片成骨/成牙本质分化能力显著升高(P<0.05)。  结论:SCAP细胞膜片富含细胞外基质,且成骨/成牙本质分化能力高于单纯的SCAP,SCAP细胞膜片应用于牙髓再生更具有优势。
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