【摘 要】
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目的:探讨慢病毒介导的AP-1基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡以及Survivin表达的影响。方法:1、通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术构建三组慢病毒,即AP-1-sh RNA-1/2/3,并
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目的:探讨慢病毒介导的AP-1基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖、凋亡以及Survivin表达的影响。方法:1、通过慢病毒载体介导的RNA干扰技术构建三组慢病毒,即AP-1-sh RNA-1/2/3,并测定其病毒滴度。2、实时荧光定量PCR及Western blot验证各组慢病毒沉默AP-1效果,筛选出沉默效果最佳的慢病毒。3、将沉默效果最佳的慢病毒感染SKOV3细胞作为实验组,未感染病毒及感染空载体病毒SKOV3细胞作为对照组,用MTT法及Annexin V-APC观察SKOV3细胞增殖、凋亡情况,并用实时荧光定量PCR、Western blot检测SKOV3细胞Survivin表达。结果:1、经测序证实,已成功构建AP-1-shRNA-1/2/3三组慢病毒,病毒滴度均大于2×10~8TU/m L。2、实时荧光定量PCR及Western blot验证三组病毒均能在m RNA及蛋白水平沉默AP-1的表达,其中AP-1-sh RNA-3沉默效果最佳,用于后续实验。3、沉默AP-1后,SKOV3细胞增殖受到抑制、凋亡增加、Survivin m RNA转录水平和蛋白表达水平降低。结论:慢病毒介导的AP-1基因沉默可致卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制、凋亡增加,其机制可能与Survivin的下调相关,具体机制仍需进一步研究。
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