小海马水提物的高效液相色谱指纹图谱及抗氧化活性研究

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海马是一味名贵,常用的滋补药材,由于分布海域不同各地小海马有效成分的含量也不一而足,相差较大,质量很难控制。为保证临床用药的安全性,加强小海马中成药、小海马制剂的质量稳定性,减小批次生产之间质量的差异性,加强小海马药材质量控制及小海马提取物有效成分的研究尤为有意义。近年对小海马有效成分的药理作用研究进展缓慢,本文从小海马提取物的抗氧化活性成分研究着手,建立了在线分离,筛选,鉴别小海马抗氧化活性成分的体系,节约了人力物力财力,是一种值得推广的陆源和海洋药物活性成分筛选,鉴别的新方法。 文章对小海马的产地、有效成分、小海马的药理作用及研究进展;指纹图谱建立的方法和应用;天然产物中抗氧化活性成分筛选方法及研究概况进行了详细的综述。重点阐述了高效液相指纹图谱在质量控制中的应用及抗氧化活性成分研究方法的进展。 对小海马有效成分的提取方法的进行了研究比较并建立了小海马质量控制的高效液相色谱指纹图谱分析方法。在选定的最佳色谱条件下,小海马水提物大部分化合物达到基线分离,该方法的系统适应性、精密度、重复性、稳定性良好;对10批小海马样品进行分析,建立小海马药材质量控制的高效液相色谱指纹图谱,采用Excel软件进行相似度计算,对小海马进行真伪辨别和质量评价,结果表明该方法简捷、有效,是小海马药材鉴别及质量控制的有效方法;对海马提取物中含量最高的三个物质进行高分辨质谱和紫外光谱分析,经鉴定分别是次黄嘌呤,尿嘧啶和黄嘌呤;用同样的提取方法和色谱条件对其它7种药用海洋动物进行相同处理,通过图谱比较可知小海马水提物的高效液相色谱指纹图谱与其它7种海洋动物的HPLC图谱差异显著,可以作为小海马药材质量控制的方法之一。 采用离线及在线的方法研究了小海马提取物中有效成分的抗氧化活性。首先在离线实验中,以小海马提取物的抗氧化活性能力为考察指标,优化了提取溶剂,最终确定以水为提取溶剂;分别用ABTS和DPPH自由基考察小海马水提物的与自由基清除能力之间的量效关系和小海马水提物清除自由基的反应动力学,使用这两种自由基得到的实验结果能够互相印证,说明此实验方法切实可信;在在线实验中,首先优化了在线筛选的条件,在选定的最佳条件下,分别用ABTS和DPPH自由基进行了小海马水提物在线抗氧化实验,从水提物中可以发现有3个抗氧化能力的物质分别为次黄嘌呤,苯丙氨酸及色氨酸,且使用两种不同的自由基得到的结果能够互相得到印证,证明实验中发展的在线分离,测定的方法真实可信,用同样的方法处理了其它7种药用海洋生物,分别得到了抗氧化能力大小不同的图谱,说明该体系有很广泛的适应性。 通过以上研究,本文解决了药典海洋药物小海马研究中存在的一些难题,并为陆源中草药及海洋药物活性成分的快速分离、鉴别、筛选、测定提供了一系列新方法。
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