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目的: 考察黄芪甲苷(ASI)预防小鼠EAE的药效，并在筛选出黄芪甲苷药效作用的基因靶点Egr1的基础上，分别使用人神经细胞SH-SY5Y细胞模型探讨Egr1基因对神经细胞生长的影响，以及应用Egr1基因缺失小鼠诱导EAE疾病，研究Egr1在EAE疾病和中枢神经病变的作用及机制，最终揭示黄芪甲苷通过Egr1及下游信号通路预防EAE的分子药理学机制，为黄芪甲苷作为临床候选药物提供临床前研究基础。 方法: 1.黄芪甲苷预防EAE小鼠发病的作用研究:在C57BL/6小鼠诱导EAE模型，同时腹腔预给黄芪甲苷，进行行为学评分和测量体重，监测EAE疾病的症状，结合病理学分析方法考察黄芪甲苷的药效作用，并使用液相色谱串联质谱(LC-MS)方法检测黄芪甲苷在EAE模型小鼠中是否通过血脑屏障。 2.黄芪甲苷预防小鼠EAE疾病药效作用调控基因筛选:采用PCR-Array法对黄芪甲苷给药后小鼠海马中基因的表达进行分析，筛选出黄芪甲苷给药后表达明显变化基因并进一步进行验证。使用神经新生基因表达分析的PCR Array筛选在野生型和Egr1基因敲除小鼠海马中神经新生基因的变化。 3.Egr1基因保护神经细胞抗凋亡功能研究:采用DNA重组技术，构建EGR1基因过表达质粒，瞬时转染人源神经细胞SH-SY5Y过表达EGR1基因，同时在该细胞株中采用RNA干扰技术(RNAi)沉默EGR1基因的表达，分析EGR1基因对神经细胞活力以及凋亡的影响，并检测EGR1基因作为神经细胞核转录因子可能调控的靶基因和影响的下游信号通路。 4.Egr1基因对EAE疾病进程影响研究:使用Egr1基因敲除小鼠诱导EAE模型，研究Egr1基因敲除对EAE疾病发病程度和发病率的影响，并检测其对EAE疾病模型小鼠中枢神经系统海马和脊髓组织中神经细胞凋亡和神经细胞生长相关信号通路的影响。 5.黄芪甲苷通过Egr1保护神经细胞抗氧化损伤的体外实验:采用荧光素酶双报告基因法检测黄芪甲苷对神经细胞中靶基因Egr1的激活作用以及量效关系。采用细胞免疫染色法(ICC)法检测黄芪甲苷促进Egr1进入神经细胞细胞核的作用。在神经细胞H2O2氧化损伤模型中，分析黄芪甲苷保护神经细胞防止凋亡的作用。 6.黄芪甲苷通过Egr1提高EAE疾病模型小鼠神经细胞抗凋亡的体内实验:对黄芪甲苷给药后EAE模型小鼠海马和脊髓组织的神经凋亡情况进行分析，并对神经细胞凋亡相关信号通路进行检测，考察黄芪甲苷对EAE模型小鼠海马组织神经细胞凋亡的影响。 7.黄芪甲苷对Egr1基因敲除小鼠EAE疾病的影响:在Egr1基因敲除小鼠诱导EAE模型，与野生型EAE模型小鼠比较，分析黄芪甲苷对Egr1基因敲除后EAE模型小鼠的药效作用。 结果: 1.黄芪甲苷预给药减轻EAE小鼠疾病症状。EAE疾病模型条件下，黄芪甲苷可以透过血脑屏障到达小鼠中枢神经组织脑和脊髓。 2.PCR-Array法筛选出黄芪甲苷药效作用相关靶点早期生长反应基因Egr1。黄芪甲苷预给药并全程给药EAE小鼠，能显著上调Egr1基因的mRNA和蛋白表达。EAE模型小鼠中枢神经系统海马和脊髓中Egr1基因表达下调。Egr1基因敲除小鼠海马中神经新生相关基因表达下调，黄芪甲苷预给药通过激活Egr1能提高EAE模型小鼠海马中神经新生相关基因的表达。 3.人神经细胞SH-SY5Y过表达EGR1基因，并使用EGR1siRNA，使细胞中EGR1基因表达沉默。发现EGR1基因在神经细胞中过表达可以促进神经细胞活力，而EGR1基因干扰能显著促进神经细胞的凋亡。筛选出神经细胞中EGR1调控靶基因TGF-β1，发现神经细胞中EGR1基因直接参与对TGF-β1基因表达的转录调控。 4.Egr1基因敲除的EAE模型小鼠的发病症状和发病率明显高于野生型EAE模型小鼠。Egr1基因敲除EAE模型小鼠中枢神经系统脑和脊髓中神经细胞显著凋亡，TGF-β1信号通路及神经营养因子信号通路蛋白的激活水平显著下降。 5.黄芪甲苷在神经细胞中可以浓度梯度依赖性提高Egr1的表达，并能促进Egr1进入神经细胞细胞核。黄芪甲苷能通过提高Egr1的表达保护神经细胞减少H2O2造成的氧化损伤。 6.黄芪甲苷在EAE模型小鼠中给药能减少小鼠中枢神经系统脑和脊髓中神经细胞的凋亡，并对TGF-β1信号通路和神经营养因子信号通路蛋白的激活有显著的促进作用。 7.黄芪甲苷对Egr1基因敲除EAE疾病模型小鼠的治疗效果下降。 结论: 本研究工作初步探讨了黄芪甲苷通过调控Egr1参与多发性硬化症动物模型EAE的预防作用及其分子机制，为黄芪甲苷预防多发性硬化症的临床应用提供实验依据。