【摘 要】
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干扰素是一种细胞因子,具有抗病毒,抗肿瘤和免疫调节特性.用PCR方法扩增了鸡干扰素-γ基因组基因,此基因包括四个外显子和三个内含子,并将其克隆到克隆载体pGEM-T载体上,和亚
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干扰素是一种细胞因子,具有抗病毒,抗肿瘤和免疫调节特性.用PCR方法扩增了鸡干扰素-γ基因组基因,此基因包括四个外显子和三个内含子,并将其克隆到克隆载体pGEM-T载体上,和亚克隆到真核表达载体pCI-neo载体上.将这一重组载体转染到兔子成纤维细胞系中进行真核表达,检测其表达情况,由于没有原蛋白制备抗体证实其表达情况,故通过RT-PCR获得鸡干扰素-γcDNA基因,就证实了鸡干扰素-γ基因组基因在兔子成纤维细胞细胞系已转录.经序列分析发现克隆的鸡干扰素-γcDNA基因存在一个点突变(G→A),这一突变导致一个三联体密码子的改变,GAA→AAA,即氨基酸由谷氨酸(Glu)→赖氨酸(Lys),随后将鸡干扰素γcDNA基因亚克隆到原核表达载体pBV220上,并将其转导到大肠杆菌DH5α中,进行温度诱导,获得一个18KDa的特异蛋白带,其表达量占细胞总蛋白的8.75﹪.
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