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目的:研究温和灸肾俞穴对D-半乳糖致亚急性衰老大鼠肝脏细胞周期、P19ARF/P53/P21CiP1信号通路的作用,从信号转导角度探讨艾灸延缓衰老的作用机制,为艾灸延缓衰老提供实验资料。
方法：
48只雄性SD大鼠按体重随机分为正常组、模型组、艾灸治疗组、维生素E治疗组,每组12只。采用D-半乳糖连续大剂量腹腔注射法建立大鼠亚急性衰老动物模型。应用Morris水迷宫试验观察各组大鼠行为学表现;检测各组大鼠脏体比值;应用生物化学比色法检测各组大鼠血清和肝组织的SOD、MDA含量;采用流式细胞术检测各组大鼠肝脏细胞周期;应用荧光定量PCR方法检测各组大鼠肝组织P19ARF、P53、P21CiP1、MOM2 mRNA的表达。
结果：
1.Morris水迷宫试验:(1)与正常组比较,模型组大鼠各时间点的逃避潜伏期均有升高趋势,但无统计学意义(P＞0.05);与模型组比较,维生素E治疗组第2天的逃避潜伏期显著下降(P＜0.01),艾灸治疗组第4天的逃避潜伏期显著下降(P＜0.05)。(2)与正常组比较,模型组、艾灸治疗组、维生素E治疗组大鼠120s内穿台次数均明显减少(P＜0.05,P＜0.01);与模型组比较,艾灸治疗组、维生素E治疗组大鼠120s内穿台次数显著增加(P＜0.01,P＜0.05)。在大鼠平台限活动时间比较中,与正常组比较,模型组显著减少(P＜0.05);与模型组比较,艾灸治疗组、维生素E治疗组差异均无统计学意义(P＞0.05)。
2.在各组大鼠脏体比值比较中:与正常组比较,模型组大鼠胸腺:体重比值显著降低(P＜0.05);脾脏:体重比值显著升高(P＜0.05)。与模型组比较,艾灸治疗组大鼠胸腺:体重比值有升高趋势,脾脏:体重比值有降低趋势,但差异均无统计学意义(P＞0.05)。
3.SOD和MDA:与正常组比较,模型组、艾灸治疗组、维生素E治疗组血清和肝组织SOD均显著降低(P＜0.01):与模型组比较,艾灸治疗组血清和肝组织SOD明显升高(P＜0.05,P＜0.01):与维生素E治疗组比较,艾灸治疗组肝组织SOD明显升高(P＜0.05)。与正常组比较,模型组、艾灸治疗组、维生素E治疗组血清和肝组织MDA均显著升高(P＜0.05,P＜0.01):与模型组比较,艾灸治疗组血清和肝组织MDA均显著降低(P＜0.05,P＜0.01);与维生素E治疗组比较,艾灸治疗组血清和肝组织MDA均显著降低(P＜0.05,P＜0.01)。
4.肝脏细胞周期:与正常组比较,模型组大鼠肝脏G0/G1期细胞比例明显升高(P＜0.05),PI指数降低(P＜0.05);与模型组比较,艾灸治疗组、维生素E治疗组大鼠肝脏G0/G1期细胞比例降低(P＜0.05),PI指数升高(P＜0.05);艾灸治疗组与维生素E治疗组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。
5.P19ARF、P53、P21CiP1、MDM2 mRNA表达:与正常组比较,模型组的P19ARF、P53、P2lCiP1 mRNA表达均显著升高(P＜0.01),MDM2 mRNA表达显著降低(P＜0.05);与模型组比较,艾灸治疗组、维生素E治疗组的P19ARF、P53、P21CiP1 mRNA表达均显著降低(P＜0.01,P＜0.05),MDM2 mRNA表达显著升高(P＜0.05);艾灸治疗组与维生素E治疗组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。
结论：
1.温和灸肾俞穴对亚急性衰老大鼠空间学习记忆能力具有一定的改善作用。
2.温和灸肾俞穴能够提高亚急性衰老大鼠血清和肝组织SOD含量,降低MDA含量。
3.温和灸肾俞穴可能通过降低亚急性衰老大鼠肝脏细胞G0/G1期细胞比例,升高PI指数,增加有丝分裂原的反应能力和合成DNA的能力,使细胞得以顺利地进入S期,从而发挥延缓其衰老的作用。
4.温和灸肾俞穴可能通过下调亚急性衰老大鼠肝组织P19ARF、P53、P2lCiP1 mRNA的表达,上调MDM2,mRNA的表达,有效调节P19ARF/P53/P21Cipl信号途径,进而影响细胞周期,达到延缓衰老之目的。