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目的：在“大肠主津”理论指导下，复制“津亏”慢传输型便秘动物模型，观察AQP3、AQP9功能和表达的变化，以及肠神经递质、炎性因子等调节因素的活性水平，并给予增液汤观察“增液行舟”法的干预作用，通过其“剂量-效应”、“时间-效应”关系，“以方测证”，证实AQP3、AQP9介导的结肠水代谢紊乱及调控失效是STC发病的重要环节之一，以期发现STC发病新理论、治疗新靶点，为通便药研发提供参考，同时为研究中药的通便机制提供依据。 材料与方法： 第一部分：临床研究 增液汤治疗“津亏”慢传输型便秘患者的临床研究 在2016年3月至2017年3月就诊于川北医学院附属医院中西医结合肛肠门诊的患者中筛选出符合“津亏”慢传输型便秘诊断的患者80人，按随机数字表法分为对照组和治疗组两组，每组40例，对照组给予口服麻仁润肠丸治疗，治疗组给予增液汤口服，疗程均为两周，之后对两组患者进行随访，随访内容：患者治疗前后排便情况，如排便时间、次数、粪便性状，症状评价等评分情况，以及有无出现腹痛腹胀等胃肠道不适症状，并予以详细记录，根据疗效判断标准参照年中华医学会外科分会肛肠外科学组的《便秘症状及临床疗效评估》评价标准，统计出治疗组和对照组治疗前后主要症状评分，并计算总积分。分析两组患者用药前后治疗效果及两种药物疗效差别。 第二部分：基础研究 第一章：“津亏”慢传输型便秘大鼠模型的建立 应用复方地芬诺酯片复制“津亏”慢传输型便秘模型：将复方地芬诺酯片按动物与人用药量比换算成相应的剂量，即 10mg/kg加生理盐水4ml制成浓度为50%的混悬液，同时除空白组外其余各组大鼠均给予限水处理，即为正常饮水量的1/3，取整数10ml，分4次用灌胃的方式给予，除第一次用复方地芬诺酯片悬浮液3ml，其余均为超纯水2ml、3ml、2ml，灌胃的时间分别是：8:00、12:00、16:00、20:00，连续灌胃7天。通过比较大鼠的一般情况及墨汁推进实验验证模型复制成功，造模成功后同时处死空白组和模型组大鼠。 第二章：增液汤对“津亏”慢传输型便秘大鼠结肠AQP3、APQ9分布、表达的影响 将120只SD大鼠按随机数字表法分为12组，即：空白组，模型组，伊托必利组，增液汤低剂量组，增液汤中剂量组，增液汤高剂量组，增液汤24小时组，增液汤48小时组，增液汤72小时组，增液汤96小时组，增液汤120小时组，增液汤144小时组，每组10只，雌雄各半。除正常组外，其余各组均通过灌胃给予复方地芬诺酯建立“津亏”慢传输型便秘大鼠模型，造模成功后，各组大鼠分别给予相应药物灌胃治疗，观察增液汤对慢传输型大鼠的通便作用，采用免疫组织化学法检测各组AQP3，AQP9在结肠的分布和表达情况，用图像分析软件自动选取具有特定颜色的所有区域，测定该区域的平均光密度（MOD）值，并取最终均值代表AQP3和AQP9阳性表达参数；采用Q-PCR法检测AQP3和AQP9在结肠组织中的水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测AQP3和AQP9蛋白表达情况。 第三章：增液汤对慢传输型便秘大鼠血清中VIP、SP、5-HT、NO、Ach、PGE2、TNF-α活性水平的影响 分组情况同第二章，各实验组大鼠给予相应干预后处死，处死前腹主动脉采血法采血，取血后颈椎脱臼处死大鼠，EP 管储存血标本，静置30min,4℃离心分离血浆，离心后将上清液分装于EP管中，-20℃冰箱保存。保存血清中细胞因子VIP、SP、5-HT、NO、Ach、PGE2、TNF-α的检测均严格按照各自的ELISA试剂盒说明书的步骤进行操作。 结果： 1、增液汤治疗“津亏”慢传输型便秘患者的临床研究 治疗组和对照组患者一般情况无明显差别，如性别、年龄、病程等方面有可比性，无统计学意义（P>0.05）,治疗后，两组患者治疗后总积分、排便情况积分及中医症候积分较治疗前均有所下降，有统计学意义（p<0.05）；治疗后，治疗组患者总积分、排便情况积分及中医症候积分相较于对照组下降明显，有统计学意义（p<0.05）。其中治疗组有效率为 92.5%，对照组有效率为 77.5%，说明两种药物治疗后临床疗效有统计学意义(P<0.05），治疗组疗效优于对照组。 2、“津亏”慢传输型便秘大鼠模型的建立 接受造模的几组大鼠与空白组大鼠相比较其粪便由连续湿软黄色长条形变为干硬褐色颗粒状，且排便量减少，精神和活动度较前明显变差，毛发光泽度下降，体重增加缓慢。接受造模的几组大鼠用墨汁灌胃后其首粒黑便排出时间明显变慢，24小时排便粒数及24小时粪便含水量较正常组均明显下降，差异具有统计学意义（P<0.01）。提示造模成功。与空白组（墨汁推进率为64.65%）相比较，模型组（墨汁推进率为56.28%）大鼠的碳墨推进率明显下降，显示差异有统计学意义（P=0.05），提示应用复方地芬诺酯可以使大鼠结肠蠕动减慢，粪便传输时间延长，说明“津亏”慢传输型便秘模型造模成功。 3、增液汤对“津亏”慢传输型便秘大鼠结肠AQP3、APQ9分布、表达的影响与空白组相比，模型组近端结肠组织中AQP3含量明显增加（p＜0.05），远端结肠组织中AQP9含量明显下降（p＜0.05）；经增液汤及伊托必利治疗后，与模型组相比，增液汤中，高剂量组、伊托必利组、增液汤72小时组的近端结肠AQP3含量明显下降（p＜0.05），远端结肠AQP9含量明显增加（p＜0.05），差异有统计学意义；增液汤低剂量组、增液汤48小时组近端结肠AQP3含量有下降趋势，远端结肠组AQP9含量有增加趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）；增液汤24小时组近端结肠组织中AQP3无明显下降（P>0.05），远端结肠组织中AQP9含量无明显增加（P>0.05），无统计学意义；增液汤96、120、144小时组近端结肠AQP3含量明显下降（p＜0.01），远端结肠AQP9含量明显增加（p＜0.01），差异有统计学意义，且差别显著，三组组间无差别。 4、增液汤对慢传输型便秘大鼠血清中VIP、SP、5-HT、NO、Ach、PGE2、TNF-α活性水平的影响 ELISA检测模型组血清中VIP、PGE2浓度较空白组明显升高，差异具有统计学意义（p＜0.05），伊托必利组、增液汤中、高剂量组、增液汤96、120、144小时组VIP浓度较模型组下降，差异有统计学意义，增液汤低剂量组、增液汤24、48、72小时组血清中VIP浓度较模型组相比无明显下降，差异无统计学意义（P>0.05） 模型组血清中SP浓度较空白组明显下降，差异具有统计学意义（p＜0.05），伊托必利组、增液汤高剂量组、增液汤72、96、120、144小时组SP浓度较模型组增高，差异有统计学意义，增液汤中、低剂量组、增液汤24、48小时组血清中SP浓度较模型组相比有增高趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）。 模型组血清中5-HT浓度较空白组明显升高，差异具有统计学意义（ p＜0.05），伊托必利组、增液汤中、高剂量组、增液汤72、96、120、144小时组5-HT浓度较模型组下降，差异有统计学意义（p＜0.05），增液汤低剂量组、增液汤24、48小时组血清中5-HT浓度较模型组相比无明显下降，差异无统计学意义（P>0.05）。 模型组血清中NOS浓度较空白组明显升高，差异具有统计学意义（p＜0.05），伊托必利组、增液汤高剂量组、增液汤96、120、144小时组NOS浓度较模型组下降，差异有统计学意义（p＜0.05），增液汤中、低剂量组、增液汤24、48、72小时组血清中NOS 浓度较模型组相比无明显下降，差异无统计学意义（P>0.05）。 模型组血清中Ach浓度较空白组明显下降，差异具有统计学意义（p＜0.05），伊托必利组、增液汤高剂量组、增液汤120、144小时组Ach浓度较模型组增高，差异有统计学意义（p＜0.05），增液汤低、中剂量组、增液汤24、48、72、96小时组血清中 Ach 浓度较模型组相比有增高趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）。 模型组血清中TNF-α浓度较空白组有升高趋势，无统计学意义（P>0.05），其余各实验组与空白组相比，均无明显变化，无统计学意义（P>0.05）。 结论： 1临床常见“津亏”慢传输型便秘患者，中药复方增液汤临床上应用疗效显著，与麻仁润肠丸相比效果更佳。 2利用复方地芬诺酯加限水法可以成功建立“津亏”慢传输便秘模型，增液汤“以方测证”再次验证了模型的成功建立，同时发挥其“增液行舟”的功效，有效的增加了粪便含水量，加快了结肠的传输速度，且疗效与用药时间和药物浓度成正比。 3故本实验得出的结论是近端结肠组织中AQP3含量增加及远端结肠组织中AQP9含量下降可能是STC的发病机制之一；随着增液汤浓度的增加及用药时间的延长，72小时后及给予中剂量药物后，AQP3下降明显，AQP9上调明显，药物作用效果明显增强，120小时后以及给予高剂量药物后，AQP3下降显著，药物作用效果达到顶峰，144小时后及给予高剂量后AQP9上调显著，说明增液汤干预治疗可下调结肠粘膜 AQP3 、上调结肠粘膜AQP9 的表达水平，而AQP3表达下降可抑制结肠水分吸收，AQP9表达上升可刺激结肠水分吸收，这可能是增液汤治疗慢传输型便秘的作用机制之一。 4血清中VIP、SP、5-HT、NO、Ach、PGE2、TNF-α活性水平的变化可能是“津亏”慢传输型便秘的发病机制之一，增液汤通过调节各种肠神经递质、炎性因子的表达来治疗“津亏”慢传输型便秘，可能是其发挥“增液行舟”效应的作用机制之一。