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石榴(Punica granatum L.)属于石榴科石榴属,为多年生落叶乔木或灌木,具有广泛的经济价值,集食用、观赏、绿化、药用于一体。目前国内外关于石榴采后品质变化的研究较少,贮藏环节已经成为影响石榴产业发展的瓶颈。本试验以安徽怀远“玉石籽”为试材,研究不同温度(0℃、5℃、10℃、15℃)处理对采后不同贮期(0-56 d)石榴籽粒可溶性糖、可滴定酸、VC、花青苷、总酚及总黄酮的含量变化的影响,同时利用RACE技术克隆花青苷合成相关基因(F3’5’H、CHI、CHS)和乙烯信号转导相关基因(ERF、ETR),然后利用RT-PCR技术分析其在不同温度贮期石榴籽粒中的表达特性。探讨石榴采后品质变化的生理及分子机理,为石榴采后贮藏保鲜提供了理论依据。主要结果如下:1、分析不同温度处理条件下不同贮期石榴籽粒的品质变化。(1)可溶性糖含量呈现先上升后下降的趋势,0℃和5℃均在28 d左右达到最高峰,10℃和15℃均在14 d左右达到最高峰。(2)在0℃条件下,可滴定酸含量于28 d达到最高值后显著下降;5℃和10℃时可滴定酸含量整体处于稳定水平;15℃时可滴定酸含量呈不断上升趋势。(3)在0℃时VC含量无明显变化;5℃、10℃和15℃时VC在14d前快速积累,之后处于稳定阶段。(4)不同温度(0℃、5℃、10℃、15℃)条件下,花青苷含量不断上升至最大值,分别为0 d的2.03倍、2.88倍、3.25倍和4.17倍。(5)在0℃和10℃是总酚含量无明显变化;5℃时总酚含量于14 d之前显著下降,之后一直处于稳定水平;15℃时总酚含量呈不断上升趋势。(6)不同温度(0℃、5℃、10℃和15℃)条件下,总黄酮含量呈先上升后下降的趋势,均于42 d达到最大值,分别为0 d的1.25倍、1.06倍、1.69倍和1.56倍。2、获得花青苷合成相关基因PgF3’5’H、PgCHI、PgCHS的cDNA全长序列。(1)PgF3’5’H基因(Gen Bank登录号:KU058892)全长cDNA为1199bp,开放阅读框918bp,编码305个氨基酸,在N端36~39处含有P450家族基因的特征保守序列(CYP基序“PPGP”);生物信息学表明,该基因编码的氨基酸序列与巨桉的Eg F3’5’H2、麻风树的Jc F3’5’H2、荷花的Nn F3’5’H2一致性分别高达86%、82%和81%。(2)PgCHI基因(Gen Bank登录号为KU058887)全长cDNA为1154bp,开放阅读框693bp,编码230个氨基酸;生物信息学表明,该氨基酸序列与芍药Pl CHI、金花茶Cn CHI和野茶树Cs CHI的氨基酸一致性均高达80%以上。(3)PgCHS基因(Gen Bank登录号为KU058888)全长cDNA为1676bp,开放阅读框1197bp,编码398个氨基酸,该蛋白含有其他CHS蛋白普遍具有的两个保守域,即cd00831和PLN03173,还具有查耳酮合酶家族的特征序列:RLMMYQQGCFAGGTVLR;生物信息学表明,该氨基酸序列与龙眼Dl CHS、荷花Nn CHS、胡杨Pe CHS等的氨基酸序列一致性都高达93%。3、获得乙烯信号转导相关基因PgERF1、PgERF2、Pg ETR的cDNA全长序列。(1)PgERF1基因(Gen Bank登录号为KU058889)全长cDNA为1612bp,开放阅读框1185bp,编码394个氨基酸;PgERF2基因(Gen Bank登录号为KU058890)全长cDNA为1611bp,开放阅读框1185bp,编码394个氨基酸;PgERF1和PgERF2蛋白均含有1个DNA-binding-site结构域,位于N端120-177氨基酸位置,为典型的AP2/ERF中心结构域;生物信息学表明,PgERF1和PgERF2氨基酸序列与巨桉Eg ERF12、可可Tc ERF1、苹果Md ERF12等氨基酸序列一致性都达到64%以上。(2)Pg ETR基因(Gen Bank登录号为KU058891)全长cDNA为843bp,开放阅读框582bp,编码193个氨基酸;生物信息学表明,该氨基酸序列与番木瓜Cp ETR、苦瓜Mc ETR、豌豆Ps ETR等氨基酸序列一致性均高达92%。4、对花青苷合成相关基因进行荧光定量表达分析。(1)在0℃、5℃、10℃条件下,PgF3’5’H表达量均呈上升趋势,15℃时PgF3’5’H表达量不稳定;PgF3’5’H基因表达与花青苷含量呈显著正相关。(2)在0℃时PgCHI表达量于14 d后显著上升;5℃、10℃和15℃时表达量于14 d后呈不断下降趋势;0℃时PgCHI基因表达与花青苷含量呈显著正相关;5℃、10℃和15℃时PgCHI基因表达与花青苷含量呈显著负相关。(3)在0℃时PgCHS基因表达量呈不断上升趋势;5℃、10℃和15℃基因表达量显著低于0℃;在0℃条件下,PgCHS基因表达与花青苷含量呈显著正相关。5、对乙烯信号转导相关基因进行荧光定量表达分析。(1)PgERF1和PgERF2基因表达量一致性高达0.954**;在0℃条件下,2个基因表达量呈不断上升趋势;在5℃、10℃和15℃条件下,基因表达量整体呈先上升后下降的趋势,分别在28 d、14 d和14 d达到最大值。(2)在0℃、5℃和10℃条件下,Pg ETR基因表达量于14 d上升至最大值,之后有不同程度的下降;在15℃条件下,Pg ETR基因表达量呈先上升后下降的趋势,于42 d达到最大值。