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毒氟磷是一种新型、高效的植物抗病毒剂,由贵州大学精细化工研究开发中心研究、开发。目前被广泛的应用在番茄和黄瓜病毒病、烟草花叶病毒病以及南方水稻黑条矮缩病。ELISA检测方法不存在仪器法上的缺点,可以大批量的对检测样品进行筛选,在小分子农药残留上被广泛应用。本论文合成不同结构的毒氟磷半抗原(DHS和DHL),选择碳二亚胺法将半抗原与蛋白偶联,偶联后免疫兔子获得抗体,并用高碘酸钠法及HRP酶对抗体进行了标记。同时通过优化包被原的包被浓度与抗体的稀释倍数,建立直接竞争ELISA方法。将抗体和相应的异构体之间进行交叉反应,研究抗体的特异性手性识别。并通过8种毒氟磷结构类似物的抗原与抗体进行交叉反应,进一步研究抗原与抗体的构效关系。取得以下研究结果。(1)设计、合成毒氟磷半抗原(DHS和DHL),并通过核磁共振(1H-NMR,13C-NMR)、质谱(MS)和红外光谱(IR)鉴定半抗原的结构。制备6种免疫原X-DHS/DHL-BSA、S-(+)-DHS/DHL-BSA和R-(-)-DHS/DHL-BSA和6种包被原X-DHS/DHL-OVA、S-(+)-DHS/DHL-OVA和R-(-)-DHS/DHL-OVA通过全波长紫外光谱法鉴定偶联成功,获得6种毒氟磷的多克隆抗体。采用间接竞争ELISA方法检测抗血清,研究结果表明:血清效价较高的为1:80000,最低的血清效价为1:10000。成功测定了抗体的亲和常数。X-DHS/DHL的酶标多克隆抗体亲和常数Ka分别为2.5×109和3.0×109 L/mol,S-(+)-DHS/DHL的酶标多克隆抗体Ka分别为2.2×109和1.8×109 L/mol,R-(-)-DHS/DHL的酶标多克隆抗体Ka分别为5.0×109和5.3×109 L/mol。(2)建立的ELISA检测方法在1-5000 ng/m L内,抗原抗体结合率B/B0(%)与毒氟磷的浓度对数(lgC)的线性关系,线性回归方程为B/B0=-15.8lgC+68.4,线性系数分别为R2=0.9986。抑制50%时的毒氟磷浓度分别为IC50=37.5 ng/mL,若以80%的结合率作为最低检出量,则毒氟磷在该方法下的检出限为IC20=2.8 ng/mL。用ELISA方法检测番茄、黄瓜、大米和烟草,其日内和日间的回收率分别为70.0-87.3%和70.2-80.7%,相对标准偏差分别为7.1-11.2%和8.4-12.1%。同时也建立了LC-MS/MS方法检测毒氟磷在番茄、黄瓜、大米和烟草,其所有样品基质中的日内和日间的回收率分别为71.9-93.6%、74.5-91.2%,相对标准偏差分别为2.9-8.5%和6.9-15.2%。(3)在6种多克隆抗体的特异性识别试验中,X-DHS/DHL与S-(+)-DHS/DHL和R-(-)-DHS/DHL的抗体进行交叉反应,其交叉反应率大约在100%,表明X-DHS/DHL抗体不能识别相应的旋光异构体。而S-(+)-DHS/DHL和R-(-)-DHS/DHL的多克隆抗体有相应的手性识别位点。6种多克隆抗体被成功制备,并且研究了抗体之间识别的差异,8种毒氟磷类似物的抗原与制备的抗体之间进行交叉反应,为抗原与抗体之间相互作用的机理研究提供了一定的支持,建立的直接竞争ELISA方法,为开发稳定、商品化的毒氟磷试剂盒奠定了一定的基础。