骨髓间充质干细胞移植对大鼠永久性脑梗塞后侧枝代偿及BFGF表达的研究

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背景:脑梗塞是多数国家的三大致死疾病之一,其发病率和病死率正逐年上升。随着静脉溶栓和血管介入治疗的推广使得脑梗塞死亡率降低,但这些治疗措施并不能解决脑梗塞后遗留的神经功能缺损。运用骨髓间充质干细胞治疗脑梗塞是未来发展方向之一。  以往的研究发现间充质干细胞移植能上调促血管因子表达,促进脑组织的血管再生,减轻神经功能障碍。但是,目前仍不清楚间充质干细胞移植能否促进软脑膜表面血管吻合以及基底动脉等脑部侧枝代偿。因此,本实验将着重对间充质干细胞移植治疗脑梗塞后侧枝代偿进行研究。将通过以下三部分实验进行研究。  第一部分  目的:探讨大鼠永久性脑梗塞后侧枝代偿的变化。  方法:选用21只250g-280g雄性SD大鼠,分为正常组、术后1天组、术后5天组以及术后10天组。通过线栓法建立永久性大脑中动脉闭塞动物模型(pMCAO)。术后24小时观察大鼠症状,行TTC染色明确梗死部位。采用乳胶灌注的方法,观察、测量、比较四组大鼠梗塞侧软脑膜表面吻合血管、基底动脉的直径。  结果:  1.术后大鼠出现倒悬时左前肢不能完全伸直、行走时向左侧偏倒或原地向左侧转圈的症状。  2.术后24小时TTC染色显示梗塞侧大脑半球大面积皮质、纹状体、海马的梗死。  3.术后5天组及术后10天组软脑膜大脑前动脉与大脑中动脉吻合血管直径增大,与正常组、术后1天组相比有统计学意义。术后1天组与正常组相比无统计学意义。  4.术后5天组及术后10天组基底动脉直径增大,与正常组相比有统计学意义。  小结:大鼠永久性脑梗死后存在软脑膜表面吻合血管和基底动脉的扩张。  第二部分  目的:分离、培养用于尾静脉移植的大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSC)。  方法:用贴壁分离方法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测CD29、CD31、CD44、CD45表达。  结果:从大鼠骨髓分离培养的BM-MSC呈长梭形,旋涡状排列。流式细胞术检测CD29(+)、CD31(-)、CD44(+)、CD45(-)。  小结:通过全骨髓分离培养方法获得足量的BM-MSC。  第三部分  目的:探讨骨髓间充质干细胞移植对大鼠永久性脑梗塞后侧枝代偿以及BFGF蛋白表达影响。  方法:本部分实验将68只250g-280g雄性SD大鼠,分为阴性对照组、移植组(低、中、高剂量组)。阴性对照组、移植组(低、中、高剂量组)均在pMCAO术后3天进行尾静脉移植,分别移植PBS、5*104个BM-MSC、5*105个BM-MSC、2*106个BM-MSC。  在移植后第7天,用TTC染色方法检测梗死面积;用乳胶灌注方法检测梗塞侧软脑膜表面吻合血管、基底动脉的变化;用尾静脉注射异硫氰酸荧光素右旋糖酐方法检测皮质区梗塞灶周边的微血管面积;用蛋白印迹方法检测梗塞侧海马、纹状体、皮质BFGF蛋白。  结果:  1.中、高剂量组梗死面积明显减少,与低剂量组、阴性对照组相比较有统计学差异。  2.中、高剂量组梗塞侧软脑膜表面吻合血管直径明显增加,与低剂量组、阴性对照组比较有统计学差异。  3.移植组(低、中、高剂量组)基底动脉直径增加,与阴性对照组相比较有统计学差异。移植组之间比较有统计学差异。  4.中、高剂量组皮质区梗塞灶周边微血管面积明显增加,与低剂量组和阴性对照组比较有统计学差异。  5.在梗塞侧海马、纹状体区域,移植组(低、中、高剂量组)BFGF蛋白表达增加,与阴性对照组比较有统计学差异。在梗塞侧皮质区域,高剂量组BFGF蛋白表达较其余各组增加。  小结:  1.骨髓间充质干细胞移植促进大鼠永久性脑梗塞后侧枝代偿,上调梗塞侧大脑半球BFGF蛋白表达。  2.骨髓间充质干细胞移植减少大鼠永久性脑梗塞后梗死面积,增加皮质区梗塞灶周边微血管面积。  全文结论:  1.初步证明大鼠永久性脑梗塞后存在软脑膜吻合血管和基底动脉扩张。  2.初步证明了大鼠永久性脑梗塞后经尾静脉移植骨髓间充质干细胞能促进侧枝代偿、上调BFGF蛋白表达。
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