柞蚕模式识别受体PGRP-A的序列分析及重组表达

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:weiwei05516
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
昆虫的免疫系统与脊椎动物不同,它没有T细胞和B细胞,没有脊椎动物所具有的补体系统。尽管它没有获得性免疫系统,但是却具有可以对病原微生物做出快速和有效应答的先天性免疫系统。肽聚糖识别蛋白(PGRP)是重要的先天性免疫基因家族,是一种重要的模式识别受体,它可以识别微生物表面的肽聚糖(PGN)并启动免疫反应。迄今为止,在多种昆虫和其他动物中都发现了PGRP,尽管这些PGRP在进化过程中,结构上表现的很保守,但是在功能和表达模式方面确是不一样的。柞蚕(Antheraeapernyi)是鳞翅目大蚕蛾科柞蚕属的一种绢丝类昆虫,除了作为纺织工业原料利用外,还有很高的药用和食用等经济价值。为了能够更全面的了解PGRP在鳞翅目昆虫先天性免疫中的功能,本实验以柞蚕为研究对象,克隆鉴定出一种肽聚糖识别蛋白,将其命名为PGRP-A,利用分子生物学和生物信息学方法对柞蚕PGRP-A基因进行研究,获得的主要结果如下:1.PGRP-A基因的克隆及序列分析:设计简并性引物,经PCR克隆扩增获得了1个新基因PGRP-A的全长序列。该序列全长961bp,包括由40个核苷酸组成的5’端非编码区(5’UTR)、由582个核苷酸组成的开放阅读框(ORF)编码193个氨基酸,以及由339个核苷酸组成的3’端非编码区(3’UTR)。其中,编码氨基酸的预测分子量大小为22.0kDa,等电点为7.368。构建系统进化树分析表明柞蚕PGPR-A氨基酸序列与印度柞蚕PGRP的同源性最高。2.PGRP-A基因的表达分析:采用PCR方法扩增了柞蚕PGRP-A的ORF,并连接至表达载体pET-28a(+),然后将重组质粒转入大肠杆菌Transetta(DE3)中,用不同浓度的IPTG进行诱导表达,经过SDS-PAGE和Westernblotting检测,结果表明重组蛋白在大肠杆菌中得到了稳定的表达,并用Ni-NTA亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,为下一步研究其功能奠定了基础。
其他文献
探究性学习是美国著名教育家芝加哥大学教授施瓦布首倡的,他指出:“如果要学生学习科学的方法,那么有什么学习比通过积极地投入到研究的过程中去更好呢?”探究性教学是以发展
今年4月,继阿里巴巴高调宣布进军行业网站领域后,网盛科技8日宣布正式推出基于行业网站联盟的大型商业门户与搜索平台“生意宝”.
读诗使人聪慧这是英国十七世纪杰出的哲学家培根的名言,“情动于中而形于言,言之不足故嗟叹之,嗟叹之不足故永歌之,永歌之不足,不知手之舞之足之蹈之也”(《诗大序》)。 Rea
皖西白鹅是我国优良的安徽地方中型鹅品种,但其产蛋特点呈现季节性,有极强的就巢性,导致皖西白鹅产蛋量低下,因此消除就巢性可能是提高皖西白鹅繁殖性能的有效方式。家禽体内催乳
应激是一种非特异性的全身性反应,扰乱内环境的代谢平衡。热应激和热损伤,主要发生于高温天气,会引起中暑,心力衰竭,氧化应激及炎症反应,给人类生产生活及畜牧业的发展带来严重的危
我国是一个世界养猪大国,生猪出栏量、存栏量和猪肉产量均居世界首位:同时养猪业又在我国整个畜牧业中占有主导地位,猪肉在肉类总产量中占了绝大部分。养猪业对调整农村经济结构
今年9月,在北京人民大会堂召开的自主创新品牌大会上,一家来自祖国边陲大兴安岭生产蓝莓系列产品的民营企业荣膺“创新品牌优秀企业奖”.rn大兴安岭、野生蓝莓,特殊的地域、
“墙角数枝梅,凌寒独自开.遥知不是雪,为有暗香来.”刘梅霜的名字让我们一下就想到了王安石的《梅花》.也许刘梅霜的父母希望自己的女儿能够像寒冬的梅花一样,在冰霜严寒的侵
目的:本试验首先人工感染绵羊肺炎支原体(MO)得到绵羊肺炎支原体病例,然后用巴什拜羊和盘羊杂交羊重组SPLUNC1蛋白治疗感染MO的盘羊杂交羊,再用ELISA和real-time q PCR的方法
本研究主要通过筛选对水牛CD14基因有抑制作用的shRNA片段,利用慢病毒载体介导的RNA干扰技术,体外研究其对水牛外周血单核巨噬细胞CD14基因的抑制效果及在LPS刺激下对相关基