【摘 要】
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本论文将含嗜热栖热菌(T.thermophilus HB27)的SOD基因在大肠杆菌中进行了高效表达,通过发酵生产获得了得到耐高温的Mn-SOD。
利用两段超滤技术对Mn-SOD的分离工艺进行
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本论文将含嗜热栖热菌(T.thermophilus HB27)的SOD基因在大肠杆菌中进行了高效表达,通过发酵生产获得了得到耐高温的Mn-SOD。
利用两段超滤技术对Mn-SOD的分离工艺进行了研究,所选用的超滤膜为截留分子量50 kDa的聚醚砜膜和100 kDa的再生纤维素膜,获得的最佳超滤分离条件为:100 mMNaCl+50 mM磷酸钠缓冲溶液(pH6.0),搅拌速率900 rpm,流速13.3 L/m2h。经过超滤分离之后,SOD回收率为86％,纯度为93％,蛋白活性为1,417.5 U/mg。
由Mn-SOD的表征结果可知,该SOD的类型为Mn-SOD,等电点为pI6.2,分子量为96 kDa,单亚基分子量为24 kDa,是四聚体结构;该SOD稳定的pH范围为pH5.0-7.0,最适作用温度为80℃,最适pH值为5.0;该酶在80℃和90℃时比较稳定,在100℃时处理60 min,酶活剩余仍为57％;K+、Fe2+、Ni2+、Hg2+、Co2+、Mg2+等金属离子对Mn-SOD具有抑制作用,而Zn2+、Cu2+、Al3+、Mn2+对Mn-SOD酶活性具有促进作用。对Mn-SOD进行圆二色谱分析可知,其二级结构中α螺旋占66％,与理论值接近。
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