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目的:探讨三氧化二砷(As<,2>O<,3>)联合腺病毒介导的早幼粒细胞性白血病基因(Ad-pml)抗肝癌细胞作用。
方法:同时设Ad-pml组、As<,2>O<,3>组、As<,2>O<,3>联合Ad-pml组以及正常细胞对照组,运用分子生物学和细胞生物学技术,观察联合应用As<,2>O<,3>和Ad-pml基因体外、体内治疗肝癌的效果,并进一步探讨其作用机制及特点。
结果:Ad-pml与As<,2>O<,3>对肝癌细胞体外生长的影响:两因素析因设计分析结果表明,单用Ad-pml处理肝癌细胞,其抑制作用随Ad-pml MOI值的增加而增加(P<0.05),单独应用As<,2>O<,3>在浓度小于5μmol/L时,未发现有明显的肿瘤抑制作用(P>0.05);As<,2>O<,3>和Ad-pml联合应用具有协同抗肿瘤作用,二者之间存在着交互作用(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡结果:用Ad-pml和As<,2>O<,3>共同作用肝癌细胞24小时后,早期细胞凋亡率明显增高。RT-PCR结果表明,联合治疗组p53表达最高,而Bcl-2表达最低,相反,肝癌细胞对照组p53表达最低,而Bcl-2表达最高。应用不同处理因素处理的肝癌细胞在裸鼠体内形成肿瘤的结果表明:Ad-pml及Ad-pml和As<,2>O<,3>联合应用处理过的肝癌细胞在注射后6W内均未形成明显的肿块,而As<,2>O<,3>处理过的细胞及未加处理的细胞注射后均形成明显的肿块,前者的体积略小于后者的体积(分别为0.083±0.005cm<3>和0.097±0.031 cm<3>),但统计学上无显著性差异(P>0.05)。分别应用PBS、As<,2>O<,3>、Ad-pml、Ad-pml+As<,2>O<,3>对肿瘤组织进行多点多次治疗后,应用前列腺B超测定各组肿瘤的体积,统计结果表明:单独应用5μmol/L的As<,2>O<,3>未能明显缩小肿瘤的体积(P>0.05),单独应用MOI为20的Ad-pml可以明显使肿瘤体积缩小(P<0.05),但与二者联合应用相比,后者使瘤体体积缩小更明显(P<0.05)。
结论:As<,2>O<,3>和Ad-pml联合应用有协同抗肝癌细胞作用,其机制与增强肝癌细胞凋亡及控制凋亡相关基因的表达有关。