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目的:肝肾综合征(HRS)的主要发病机制是肾小球滤过率(GFR)明显下降,其特点是肾脏无病理学及形态学改变,只是功能异常。已知肾小球系膜细胞(GMCs)收缩可引起肾小球滤过面积减少及肾小球入球动脉平滑肌细胞(VSMC)收缩可引起肾血流量减少。为探究PKC-α及IP3R1在肝坏死时引起肾动脉收缩过程中的信号转导作用,观察靶向敲除PKC-α经ET-1刺激后肾组织中PKC-α、IP3R1的表达情况及肾动脉压力的变化。利用D-氨基半乳糖(D-Gal N)联合脂多糖(LPS)诱导爆发性肝衰竭(FHF)大鼠构建HRS模型,预先将包装好的敲除PKC-α和IP3R1的重组慢病毒载体分别注入相应组别。检测肾动脉压力,检测血清生化学指标,检测肾组织中PKC-α、IP3R1蛋白及m RNA的表达。为研究HRS时GFR下降的发生机制提供理论依据。研究方法:1、构建HRS动物模型:给药造模前2周,各基因沉默组大鼠分别尾静脉注射预先包装的慢病毒载体,饲养2周后所有大鼠称重并按不同分组给药。NS组给生理盐水;D/L组、LV-NC组、LV-PKC-α组和LV-IP3R1组全部给D-Gal N(400mg/kg)/LPS(32μg/kg)的生理盐水溶液;给药体积为2ml/kg。2、肾动脉血管压力检测:各组大鼠建模12小时后,麻醉开腹,用棉签分离肠系膜上动脉及右肾动脉、右肾静脉,丝线结扎远心端肾动脉,止血夹夹闭近心端肾动脉,眼科剪斜向将血管剪出小口,用套管针插管至右肾动脉,用止血夹固定,管外三通接压力换能器及生物信号采集与处理系统。3、检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、钾离子(K+)、钠离子(Na+)及氯离子(Cl-)。4、肝肾组织常规HE染色,光学显微镜下观察肝细胞坏死情况及肾脏组织结构是否发生变化。5、应用Western blot、Real-time PCR方法分别检测各组大鼠肾组织PKC-α和IP3R1蛋白及其m RNA的表达情况。结果:1、各组肾动脉压力稳定后,D/L组及LV-NC组与NS组比较稍升高,差异有统计学意义(P=0.021<0.05);LV-PKC-α组、LV-IP3R1与NS组比较无显著性差异;LV-PKC-α组与D/L组、LV-NC组比较明显下降,差异有极显著性,(P=0.004<0.05);LV-IP3R1组与D/L组、LV-NC组比较也明显下降,有显著性差异(P=0.023<0.05)。2、血清肝肾功生物化学指标,D-L组及LV-NC组ALT、AST、BUN、Cr均在给药后12h明显升高,与NS组相比有显著性差异(P<0.05),LV-PKC-α组的Cr、BUN水平与D/L组及LV-NC组比较均降低,有显著性差异(P<0.05),但与NS组相比无显著性差异(P>0.05)。K+、Na+、Cl-浓度无明显变化。3、肝肾组织学病理检查结果,肉眼观察D-氨基半乳糖联合脂多糖给药后各组大鼠12h肝脏呈紫黑色,明显充血肿胀,弥漫出血点,质地变脆,切面有暗红色淤血溢出。光镜下肝细胞大块坏死,无肝细胞再生,纤维间隔塌陷,大量红细胞浸润。光镜下观察坏死组大鼠肾小球、肾小管结构与正常组肾组织比较无改变。4.经基因沉默后PKC-α、IP3R1蛋白及m RNA的表达情况,D/L组及LV-NC组12小时PKC-α、IP3R1蛋白和m RNA呈高水平表达,与NS组比较有显著性差异(P<0.05);而LV-PKC-α组PKC-α蛋白及m RNA的表达明显减少,与D/L组及LV-NC组比较具有显著性(P<0.05),与NS组比较无显著差异;同样LV-IP3R1组IP3R1蛋白及m RNA的表达也明显减少,与D/L组及LV-NC组比较具有显著性(P<0.05),与NS组比较无显著差异。结论:1.沉默PKC-α及IP3R1具有一定保护作用,可以减轻急性肝衰竭大鼠的肾脏损伤及肾动脉压力升高的幅度。2.预先注射敲除PKC-α基因的重组慢病毒载体可以明显抑制急性肝衰竭大鼠肾脏PKC-α蛋白及m RNA的表达。3.预先注射敲除IP3R1基因的重组慢病毒载体可以明显抑制急性肝衰竭大鼠肾脏IP3R1蛋白及m RNA的表达。