乙酸对酒精相关结直肠癌转移的作用及相关机制研究

• 作 者: 郑克鸿
• 机 构: 南方医科大学
• 出 处: 南方医科大学
• 发表日期: 2017年3期
• 关键词: 结直肠癌

目的：
　　结直肠癌(colorectal cancer，CRC)作为常见的消化系统恶性肿瘤，是导致肿瘤相关死亡的主要肿瘤类型，严重危及人们的生命健康。近年来，越来越多的研究揭示了酒精摄入与结直肠癌发生发展的关系，但相关机制至今仍未明确。本研究将主要探究乙醇刺激与结直肠癌发生发展的关系及相关分子机制，为阐明酒精相关结直肠癌的发病和转移机制提供新的科学依据。
　　方法：
　　1.乙醇激活TGF-β/SMAD信号通路抑制结直肠癌增殖和促进其迁移能力的研究
　　a.通过收集结直肠癌患者临床病理资料和个人生活信息，分析酒精摄入与结直肠癌发生发展的关系;b.通过CCK-8细胞活性检测、EdU法细胞成像、细胞凋亡检测、细胞周期检测、细胞穿孔、划痕和体内动物实验，探究乙醇刺激对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的调控作用;c.通过蛋白质免疫印迹、细胞免疫荧光、实时荧光定量PCR和ELISA，明确乙醇刺激调控结直肠正常上皮细胞和肿瘤细胞增殖和迁移的分子机制。
　　2.乙醇诱导RUNX3细胞异常定位介导EMT活动促进结直肠癌转移的研究
　　a.收集临床组织样本及患者个人信息，检测分析酒精摄入与RUNX3异常表达的关系;b.通过实时荧光定量PCR、免疫荧光和蛋白质免疫印迹实验，探究乙醇刺激与RUNX3异常表达的关系;c.利用特异性核定位RUNX3过表达质粒，进行体外恢复实验，明确RUNX3细胞内异常定位在乙醇抑制细胞增殖，促进其迁移能力过程中的作用;d.通过免疫荧光蛋白质共定位检测和免疫共沉淀实验，明确乙醇刺激导致RUNX3细胞内异常定位的机制。
　　结果：
　　1.乙醇激活TGF-p/SMAD信号通路抑制结直肠癌增殖和促进其转移的研究
　　a.酒精摄入促进结直肠癌的发病，与肿瘤T分期呈负相关且具有剂量依赖特性，与肿瘤N分期则呈正相关但不具有剂量依赖特性;b.乙醇刺激能够促进P21的表达，诱导细胞发生周期阻滞，从而抑制其增殖活性。同时还可促进Snail的表达，诱导细胞发生EMT，从而促进其迁移能力;c.乙醇刺激促进TGF-β1基因的转录和蛋白的分泌水平，激活TGF-β/SMAD信号通路。
　　2.乙醇诱导RUNX3细胞浆异常定位介导EMT活动促进结直肠癌转移的研究
　　a.乙醇刺激能够抑制RUNX3的转录水平和蛋白的核定位，促进其蛋白的胞浆表达;b.恢复RUNX3蛋白的核表达能够显著削弱乙醇刺激对细胞迁移能力的促进作用，但与细胞的增殖活性无关;c.胞浆定位的RUNX3可与Smad2和p-Smad2结合，乙醇刺激可促进RUNX3与p-Smad2蛋白的解离。
　　结论：
　　乙醇刺激主要通过激活TGF-β/SMAD信号通路，发挥其抑制结直肠癌细胞增殖、促进肿瘤细胞迁移的作用。此外，乙醇刺激还能导致RUNX3蛋白发生细胞内的异常定位，协同TGF-β/SMAD信号通路，促进结直肠癌细胞发生上皮间质转化和转移。