SOX30在膀胱癌中的表达及功能研究

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膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤,也是十大恶性肿瘤之一.SOX30基因已被证实在肺癌中发挥抑癌作用,但是其在膀胱癌中的作用尚无明确报道.  目的:检测SOX30基因在人膀胱癌组织及膀胱癌细胞系中的表达水平;研究SOX30基因的表达水平与膀胱癌的临床病理特征之间的关系;研究SOX30基因的表达水平与膀胱癌临床预后的关系;探讨SOX30基因对膀胱癌细胞生物学功能的影响.  方法:使用实时荧光定量聚合酶链式反应(Quantitative real-time reverse transcription PCR,qRT-PCR)检测SOX30基因在4株膀胱癌细胞、一株正常膀胱上皮细胞、一例正常膀胱组织以及30对膀胱癌组织及其对应的癌旁组织的mRNA表达水平并对检测结果进行统计分析;使用蛋白印记法(western-blot)检测SOX30基因在4株膀胱癌细胞、一株正常膀胱上皮细胞、一例正常膀胱组织以及随机四对膀胱癌及其癌旁组织的蛋白表达水平;使用免疫组织化学法(Immunohistochemistry)检测SOX30基因在56对膀胱癌及其癌旁组织的表达水平,并使用统计学方法分析其表达高低与膀胱癌的临床病理特征以及临床预后的关系;利用慢病毒包装感染T24细胞株和5637细胞株,使用qRT-PCR和western-blot检测病毒感染效率并对检测结果进行统计分析;使用CCK-8试剂盒检测SOX30基因对膀胱癌细胞的增殖的影响;使用Transwell法检测SOX30基因对膀胱癌细胞的迁移和侵袭的影响;使用流式细胞术检测SOX30基因对膀胱癌细胞的凋亡的影响.  结果:1.荧光定量PCR检测显示,与癌旁正常组织相比,SOX30基因在膀胱癌组织中的表达水平明显下降76.67%(23/30);western-blot实验结果显示在随机选择的四对膀胱癌及其对应的癌旁组织中,SOX30基因蛋白表达水平在膀胱癌组织中明显低于相对应的癌旁组织;2.荧光定量PCR以及western-blot分析显示SOX30基因在T24,5637,J82,SW780细胞中mRNA表达平以及蛋白的表达水平均明显低于正常膀胱上皮细胞以及正常的膀胱上皮组织;3.免疫组织化学分析显示,与癌旁正常组织相比,SOX30基因在膀胱癌组织中表达水平明显下降,并且经过统计学分析发现,SOX30表达的降低与膀胱癌患者的低生存率成正相关(P=0.0388),并且膀胱癌中SOX30基因的表达水平与膀胱癌的临床病理分期有关(P=0.019),而与患者的年龄(P=0.093)、性别(P=0.639)、肿瘤组织学分级(P=0.068)、肿瘤的大小(P=0.150)以及肿瘤的病理类型(P=0.317)无明显的相关关系;4.选择5637和T24细胞株进行慢病毒感染,荧光定量PCR和western-blot实验数据显示SOX30蛋白表达水平明显高于阴性对照组,提示过表达成功;5.CCK-8增殖实验、Transwell侵袭迁移实验以及流式细胞术检测凋亡实验数据显示;SOX30基因过表达后明显抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移,促进肿瘤细胞的凋亡.  结论:1.SOX30在膀胱癌组织中表达水平明显下降,并且与膀胱癌的临床病理分期以及膀胱癌的预后有关;2.SOX30基因过表达后抑制膀胱癌细胞的增殖、侵袭和迁移,促进膀胱癌细胞的凋亡,这些数据表明SOX30在膀胱癌中可能是一个抑癌基因,提示SOX30基因可能为改善膀胱癌预后和治疗提供一种新的、有前景的治疗靶点.
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