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目的： 炎症小体（inflammasome）活化是炎症反应的一条重要信号通路，在多种疾病的发生发展中可以检测到炎症小体的活化，比如结肠炎。本课题通过建立体内外炎症模型，研究miR-155在炎症小体活化中的调控作用，以及绿原酸的抗炎活性。 方法： (1) RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化细胞模型建立，利用LPS预刺激联合ATP活化炎症小体，建立RAW264.7巨噬细胞炎症细胞模型。实验包括应用MTT法、乳酸脱氢酶释放实验检测模型的细胞增殖活性，ELISA法检测IL-1β释放水平变化。免疫荧光法检测细胞中关于炎症小体信号通路相关蛋白发生的变化。 (2) 研究miR-155 调控 RAW264.7 巨噬细胞炎症小体活化，包括 qRT-PCR 法检测 RAW264.7细胞炎症小体模型 miR-155 的表达，将炎症小体模型细胞转染 miR-155 抑制物（inhibitor），qRT-PCR法检测转染后细胞miR-155和NLRP3 mRNA的变化。 (3) 绿原酸调控炎症小体抗炎活性。建立巨噬细胞炎症小体活化模型，加入绿原酸后，应用MTT法、乳酸脱氢酶释放水平检测细胞增殖活性，ELISA法检测IL-1β 释放水平变化。Western blot 法及免疫荧光法检测炎症活化信号分子 p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1 p45、Caspase-1 p20 及细胞因子 pro-IL-1β、cleaved-IL-1β、pro-IL-18、cleaved-IL-18蛋白变化。另外qRT-PCR法检测绿原酸对miR-155的调控，检测绿原酸和转染miR-155抑制物（inhibitor）对RAW264.7细胞炎症小体模型miR-155、IL-1β和 NLRP3 mRNA 影响，Western blot 法检测转染 miR-155 抑制物（inhibitor）对RAW264.7细胞炎症小体模型p-NF-κB蛋白表达影响，qRT-PCR法检测转染miR-155模拟物（mimics）及绿原酸对转染 miR-155 模拟物（mimics）的 RAW264.7 细胞miR-155、IL-1β mRNA 影响。ELISA 法检测 miR-155 抑制物（inhibitor）及模拟物（mimics）对RAW264.7巨噬细胞IL-1β分泌水平的影响。 (4) 绿原酸通过调控炎症小体的变化改善结肠炎，将葡聚糖硫酸钠（Dextran sulfate sodium salt, DSS）模型小鼠的结肠长度进行比较。HE法观察小鼠结肠的形态组织变化，免疫组化法观察小鼠结肠中巨噬细胞阳性率的多少。Western blot法检测绿原酸对DSS模型小鼠的结肠组织炎症活化信号分子p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1 p45、Caspase-1 p20及细胞因子pro-IL-1β、cleaved-IL-1β、pro-IL-18、cleaved-IL-18蛋白表达影响。qRT-PCR法检测绿原酸对DSS模型小鼠结肠组织miR-155影响。 结果： (1) LPS诱导TLR4信号通路活化，加入ATP后能够使RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化明显增加，包括MTT法及乳酸脱氢酶释放水平测定的细胞增殖活性降低，IL-1β释放量增加，IL-1β和NLRP3蛋白表达增多。 (2) RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化模型miR-155表达增加，当给炎症小体活化模型细胞转染miR-155抑制物 （inhibitor），细胞miR-155和NLRP3 mRNA表达减少。 (3) 用绿原酸处理RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化模型，MTT 法及 LDH 测定发现药物使细胞增殖活性上升， IL-1β释放量降低，炎症活化信号分子p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1p45、Caspase-1 p20及细胞因子IL-1β、pro-IL-1β、IL-18、pro-IL-18蛋白表达降低。绿原酸能够降低炎症小体被激活的巨噬细胞miR-155、NLRP3和IL-1β mRNA及p-NF-κB蛋白的表达，也能降低转染miR-155模拟物（mimics）的细胞miR-155、IL-1βmRNA和p-NF-κB蛋白表达。 (4) 动物实验发现结肠炎模型的小鼠结肠长度减短，巨噬细胞数量增加且p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1 p45、Caspase-1 p20、pro-IL-1β、cleaved-IL-1β、pro-IL-18、cleaved-IL-18蛋白表达比正常组高，绿原酸用药后可改善小鼠结肠炎，使炎症小体相关蛋白及miR-155表达降低。 结论： miR-155 通过上调 NF-κB 和 IL-1β 促进 NLRP3 炎症小体活化；绿原酸可抑制体内外炎症小体相关蛋白及炎性因子的产生，具有良好的抗炎作用，其抗炎机制可能与调控miR-155表达相关。 （inhibitor），细胞miR-155和NLRP3 mRNA表达减少。 用绿原酸处理RAW264.7巨噬细胞炎症小体活化模型，MTT 法及 LDH 测定发现药物使细胞增殖活性上升， IL-1β释放量降低，炎症活化信号分子p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1p45、Caspase-1 p20及细胞因子IL-1β、pro-IL-1β、IL-18、pro-IL-18蛋白表达降低。绿原酸能够降低炎症小体被激活的巨噬细胞miR-155、NLRP3和IL-1β mRNA及p-NF-κB蛋白的表达，也能降低转染miR-155模拟物（mimics）的细胞miR-155、IL-1βmRNA和p-NF-κB蛋白表达。 动物实验发现结肠炎模型的小鼠结肠长度减短，巨噬细胞数量增加且p-NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1 p45、Caspase-1 p20、pro-IL-1β、cleaved-IL-1β、pro-IL-18、cleaved-IL-18蛋白表达比正常组高，绿原酸用药后可改善小鼠结肠炎，使炎症小体相关蛋白及miR-155表达降低。 结论： miR-155 通过上调 NF-κB 和 IL-1β 促进 NLRP3 炎症小体活化；绿原酸可抑制体内外炎症小体相关蛋白及炎性因子的产生，具有良好的抗炎作用，其抗炎机制可能与调控miR-155表达相关。