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本研究以U251细胞和Hela细胞为对象,用MTT方法检测血清饥饿情况下细胞的增殖变化情况,用RT-PCR的方法检测血清饥饿情况下线粒体基因和mTERF、mTERFL基因的表达变化,从而研究细胞生长变化与mTERF、mTERFL和线粒体基因表达变化的关系。研究结果表明血清饥饿24小时IJ251细胞增殖明显受到抑制,血清饥饿12小时Hela细胞增殖受到抑制,但Hela细胞数量的减少幅度不大,显示U251细胞对血清的敏感性较Hale细胞强。在U251细胞和Hale细胞中,mTERF基因的表达在血清剥夺的初期都表现为下降的趋势,而mTERFL基因的表达表现为上升的趋势,这一结果与血清饥饿后恢复血清培养的应答是一致的,进一步证明了mTERFL和mTERF对血清的应答模式。血清饥饿的后期,由于细胞内各种因素的交互作用,血清应答规律表现为起伏变化。而线粒体基因组中的其它基因的表达与血清处理没有相关性。
在U251细胞中mTERF的表达变化与16SrRNA的表达变化曲线相似,并与细胞增殖变化曲线对应,而线粒体的蛋白编码基因的表达与mTERF的表达没有明显的相关性。mTERFL的表达变化曲线与12SrRNA的表达变化曲线相似,表明它们之间存在某种联系。在Hale细胞中,mTERF和16SrRNA之间、mTERFL与12SrRNA之间的表达也有相似的关系,但相关性较低,可能与该细胞对血清的依赖性较低有关。
血清是细胞生长的必需成分,没有血清时细胞生长停止在G0期,因此比较血清培养和血清饥饿培养时的基因表达变化可以了解细胞生长调控相关的分子机制。本研究通过分析血清剥夺后mTERF和mTERFL以及线粒体基因的表达变化关系,从另外的角度了解mTERF和mTERFL的血清应答模式。
已有研究表明,线粒体转录终止因子(mTERF)的作用是提高12S rRNA和16SrRNA的积累,从而满足蛋白翻译所需要的rRNA,加快线粒体内的蛋白合成速度,因此推测mTERF与细胞的增殖有关。本研究探讨了这一问题,为进一步研究mTERF的生理作用奠定了基础。
人线粒体转录终止样因子(mTERFL)已确定对细胞增殖具有负调控的作用,本研究对它与线粒体基因的表达关系研究,对进一步研究mTERFL的功能以及探讨线粒体与细胞增殖的关系有重要意义。