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目的：糖尿病与结直肠癌患病存在一定的相关性，糖尿病增加了患结直肠癌的风险。糖尿病人群中结直肠癌的患病率和死亡率较非糖尿病人群增加，并且与糖尿病病程关系密切。肿瘤细胞分泌免疫抑制物质抑制宿主免疫功能即肿瘤免疫抑制，在肿瘤发生、发展中起着重要作用。TGF-β1是一种很强的免疫抑制因子，作为最主要的免疫抑制分子，在肿瘤免疫抑制的产生及肿瘤的形成、发展中发挥着重要作用。结直肠癌细胞可分泌TGF-β1。糖尿病人易患结直肠癌且与糖尿病病程关系密切，是否因糖尿病病程中不同浓度的葡萄糖和胰岛素对癌细胞TGF-β1分泌水平影响不同有关，目前国内外尚无相关的系统研究报道。本研究模拟糖尿病病程不同阶段体内葡萄糖和胰岛素浓度的变化，观察不同浓度的葡萄糖和胰岛素对结直肠癌细胞株Colon26肿瘤细胞分泌TGF-β1的影响，为分析糖尿病发病过程中葡萄糖和胰岛素浓度变化与结直肠癌发生、发展的关系，提供实验和理论依据。
方法：体外常规培养Colon26肿瘤细胞。根据所用培养液外加葡萄糖和胰岛素浓度的不同，实验所用细胞共分12组：A组(对照组)RPMIl640培养液；B组RPMIl640培养液+5mmol/L葡萄糖；C组RPMI1640培养液+10mmol/L葡萄糖；D组RPMI1640培养液+25mmol/L葡萄糖；E组RPMI1640培养液+5μIu/mL胰岛素；F组RPMI1640培养液+25μIu/mL胰岛素；G组RPMI1640培养液+125μIu/mL胰岛素；H组RPMI1640培养液+5mmol/L葡萄糖+5μIu/mL胰岛素；K组RPMI 1640培养液+5mmol/L葡萄糖+125μIu/mL胰岛素；L组RPMI1640培养液+25mmol/L葡萄糖+125μIu/mL胰岛素；M组RPMI1640培养液+25mmol/L葡萄糖+5μIu/mL胰岛素；N组RPMI1640培养液+25mmol/L葡萄糖+1.25μIu/mL胰岛素。每组设3个复孔，置37℃5％CO2饱和湿度的培养箱培养48小时，培养结束后收集细胞培养上清，ELISA法检测TGF-β1的浓度，收集细胞后抽提总RNA，RT-PCR同时扩增目的片段TGF-β1和内参照β-actin，琼脂糖凝胶电泳扩增产物，凝胶成像系统上扫描分析，计算TGF-β1 mRNA相对表达量。整个实验过程均重复三次。统计学分析采用t检验和单因素方差分析，P＜0.05为有统计学差异。
结果：
1不同浓度的葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞培养上清中TGF-β1分泌的影响
1.1不同浓度的葡萄糖组对Colon26肿瘤细胞培养上清中TGF-β1分泌的影响其中D组(培养液含有25 mmol/L的葡萄糖)TGF-β1的浓度(863.12±20.26)明显高于A组(625.14±12.02)，差异有显著性(P＜0.01)；而B组、C组(培养液分别含5 mmol/L、10 mmol/L的葡萄糖)TGF-β1的浓度(635.5 1±16.97、632.52±17.88)与A组相比均无显著性差别(P＞0.05)。
1.2不同浓度胰岛素的E、F、G组(培养液中分别含有5μIU/mL、25μIU/mL、125μIU/mL胰岛素)TGF-β1的浓度(分别为622.18±10.53、614.85±14.92、617.12±16.12)与A组(625.14±12.02)相比，对Colon26肿瘤细胞培养上清中TGF-β1的分泌无显著性差别(p＞0.05)。
1.3不同浓度的葡萄糖和胰岛素同时作用组对Colon26肿瘤细胞培养上清中TGF-β1分泌的影响其中L、M、N组(培养液均含有25 mmol/L的葡萄糖)TGF-β1的浓度(分别为982.78±19.02、882.54±17.08、871.46±16.21)均明显高于A组(625.14±12.02)，差异有显著性(P＜0.01)；而H、K组(培养液均含有5 mmol/L的葡萄糖)TGF-β1的浓度(626.18±15.98、630.18±18.95)与A组相比均无显著性差别(P＞0.05)。
2.不同浓度的葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞TGF-β1mRNA表达的影响
2.1不同浓度的葡萄糖组对Colon26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA表达的影响其中D组TGF-β1 mRNA的表达(0.768±0.017)高于A组(0.540±0.012)，差异有显著性(P＜0.01)；而B组、C组TGF-β1 mRNA的表达(0.545±0.033、0.558±0.035)与A组相比均无显著性差别(P＞0.05)。
2.2不同浓度胰岛素的E、F、G组对Colon26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA的表达(分别为0.566±0.039、0.549±0.030、0.53 1±0.022)与A组相比无显著性差别(P＞0.05)。
2.3不同浓度的葡萄糖和胰岛素同时作用组对Colon26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA表达的影响其中L、M、N组的TGF-β1mRNA表达(分别为0.889±0.028、0.764±0.027、0.752±0.035)均高于A组(0.540±0.012)，差异有显著性(P＜0.01)；而H、K组的TGF-β1 mRNA表达(0.550±0.037、0.537±0.025)与A组相比均无显著性差别(P＞0.05)。
结论：
1高浓度的葡萄糖能够增加Colon26肿瘤细胞培养上清中TGF-β1的分泌，并上调Colon26肿瘤细胞TGF-β1mRNA的表达；高浓度的葡萄糖在转录水平影响Colon26肿瘤细胞TGF-β1的分泌。
2.不同浓度的胰岛素不影响Colort26肿瘤细胞TGF-β1的分泌和TGF-β1 mRNA的表达。
3.高浓度的葡萄糖和胰岛素同时作用能够增加Colon26肿瘤细胞培养上清中TGF-β1的分泌，并上调Colon26肿瘤细胞TGF-β1 mRNA的表达；高浓度的葡萄糖和胰岛素在转录水平影响Colon26肿瘤细胞TGF-β1的分泌。