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本文首次提出了将HRP及HRP标记物固定在粗孔硅胶上做成固定化酶柱,利用流动注射偶合反应化学发光体系测定HRP及HRP标记物的方法.共研究了两个体系.本方法测定HRP及HRP标记物的灵敏度高,线性范围宽,采用流动注射式进样,操作方便,而且由于采用硅胶作为固定酶的载体较前用多孔玻璃作载体要经济得多,为免疫分析提供了一种灵敏度高且易于实现操作自动化的检测方法.一、利用K<,4>Fe(CN)<,6>-H<,2>O<,2>-HRP-Luminol流动注射偶合反应化学发光体系建立了HRP及HRP标记物的测定方法.这种方法是先将K<,4>Fe(CN)<,6>和H<,2>O<,2>溶液通过HRP或其标记物的固定化柱子反应生成产物K<,3>Fe(CN)<,6>,此产物再同Luminol溶液发光,以化学发光强度来测定HRP及HRP标记物的量.该方法测定HRP的线性范围为0.04-300ug/tube,检出限为7.4ng/tube.对0.75ug/tube的HRP连续7次测定的相对标准偏差为7.1%.用该方法对羊抗人IgG-HRP(已过有效使用期的)标记物进行测定,可测到1:770,将此酶活性与HRP作对照实验,得此稀释比的HRP标记物的酶相当于20ng/tube的HRP,即用此体系测定HRP标记物的灵敏度与测HRP的灵敏度相当.实验结果表明,此方法可用于HRP及其标记物的快速,灵敏地测定,可用作流动注射化学发光免疫分析的检测方法.二、本文还利用研究K<,4>Fe(CN)<,6>-H<,2>O<,2>-HRP-Luminol体系的同样的方法研究了KI-H<,2>O<,2>-HRP-Luminol流动注射偶合反应化学发光体系测定HRP及HRP标记物的方法,但测定灵敏度不令人满意.本文从几个方面分析了利用此体系测定HRP及HRP标记物灵敏度低的原因.