【摘 要】
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非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种高致病率和死亡率的急性、烈性、接触性的传染病,强毒株感染后导致动物100%
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非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种高致病率和死亡率的急性、烈性、接触性的传染病,强毒株感染后导致动物100%的死亡率,而目前针对非洲猪瘟还并没有有效的疫苗给以预防,该病对全球的养猪业造成了巨大的威胁和经济损失。我国目前虽然尚无非洲猪瘟疫病的发生,但是随着日渐频繁的进出口贸易发展,以及人员流动的来往,该病传入我国的可能性也随之增大。为了能及时的检测出非洲猪瘟,预防该病传入我国,因此建立一种快速高效检测非洲猪瘟病毒的实验室诊断方法显得非常重要,本研究在分子生物学的基础上,利用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)快速、简便的特性,建立了一种快速检测非洲猪瘟病毒LAMP方法。本试验根据NCBI已登录的非洲猪瘟K205R基因序列,人工合成该基因质粒作为试验所需模板。通过在线软件,根据LAMP引物设计原理,针对非洲猪瘟病毒K205R基因序列设计了一套特异性引物,在进行反应条件优化后成功建立了非洲猪瘟病毒的LAMP检测方法。通过对反应产物的鉴定分析,灵敏度试验以及和常规PCR方法进行对比,结果表明所建立的非洲猪瘟LAMP检测方法可检出低于10拷贝数的非洲猪瘟DNA,其灵敏度更高于常规PCR,且特异性和稳定性良好。此方法简单、快速,在恒温水浴锅中63℃反应45mmin即可完成。反应产物除通过琼脂糖凝胶电泳分析外,还可进行可视化检测,阳性反应管在自然光下变得浑浊,加入荧光染料在紫外灯照下有绿色荧光的出现。正因为LAMP产物能进行可视化检测这一特性,加上反应条件简便,不需要复杂的仪器设备的特点,LAMP已经广泛应用于各种疫病的检测,是一种适用于实验室和现场快速检测的方法。本试验方法的建立为我国预防非洲猪瘟疫病的传入提供了参考。
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