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生物催化具有极好的立体选择性和催化效率,对工业生产手性化合物具有重要意义,因而开发新型高效的生物催化剂受到研究者们的高度关注。酶固定化可以有效提高生物酶的稳定性,从而在实际生产应用中可以抵抗或不受极端环境的影响,发挥更好的催化效率。在众多研究学者的努力下,酶固定化研究使用的技术方法和材料一直在不断发展和创新。近年来,具有特异性识别效应的生物大分子被应用到固定化的研究中,在与合适的载体材料相配合下,可以实现生物酶的高效定向固定化。因此,本文研究探索了使用ConA制备生物催化剂的几种方式,主要研究内容及结论如下: 1、通过将ConA与磁性纳米粒结合,制备了可定向固定糖基化酶的磁性固定化酶载体。该载体在水相溶液中吸附固定氯过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、漆酶,均达到了90%以上的固定化率及80%以上的活性回收率,说明ConA功能化修饰的固定化载体材料可以扩展应用于多种糖基化酶。 2、利用制得的功能化载体,实现了CPO单酶固定化及CPO与GOx双酶共固定化。单酶固定化CPO保留了与游离酶相似的活性和稳定性,可重复催化莫达非尼不对称合成,达到70%及以上的e.e.;共固定化GOx-CPO相对游离酶具有更高的催化效率,在交联后重复使用稳定性提高了两倍多,并且可在pH6条件下高效合成莫达非尼。 3、研究制备活性ConA-钒(Ⅳ)配位物并探索其相关的配位机制。配位物的活性主要受金属离子浓度,配位及催化时pH条件影响,pH9条件下配位、pH2条件下反应,催化速率最高,且此时的结合作用不会被离心破坏;表达重组ConA的大肠杆菌可以确实促进VO2+催化合成莫达非尼,底物转化率近似100%。