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目的：评价常规PCR筛查非HIV感染免疫受损人群肺孢子菌肺炎(PCP)的临床价值：建立并采用荧光定量PCR方法定量检测非HIV感染PCP患者，疑似PCP患者，非PCP呼吸道疾病患者和正常人群呼吸道标本肺孢子菌(Pneumocystisjirovecii，p.j)基因载量，以确定区分隐性感染和显性PCP肺孢子菌基因载量的阈值。
材料和方法：回顾性分析2006年1月6日至2008年7月29间756例患者(包括器官移植274例，恶性肿瘤122例，应用免疫抑制剂治疗者289例，免疫功能正常患者32例，不能获得诊断组39例)的1044份呼吸道标本六亚甲基四胺银(GMS)染色和PCR检测结果，结合患者临床资料比较两种方法痰液和支气管灌洗液标本肺孢子菌检测的敏感性和特异性。选择p.j二氢叶酸合成酶(DHPS)基因作为目标基因，设计荧光定量PCR引物和Taqman探针，以重组质粒为标准品建立标准曲线；建立p.j荧光定量PCR检测方法，并对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价；应用荧光定量PCR对非HIV感染PCP确诊患者、疑似PCP患者、非PCP呼吸道疾病患者和正常人群痰液、支气管灌洗液(BAL)和咽拭子标本进行肺孢子菌DHPS基因定量检测。
结果：痰液标本GMS染色和常规PCR检查阳性率分别为9.5％和21.1％(P<0.01)；支气管灌洗液GMS染色和PCR检查阳性率分别为25.5％和31.9％(P>0.05)。器官移植患者、恶性肿瘤患者、免疫抑制剂治疗患者等3类免疫功能受损者呼吸道标本GMS检测阳性率依次为13.5％，10.2％和16.7％:PCR检测的阳性率高达22.8％，16.7％和32.6％，均明显高于免疫功能正常患者GMS染色和PCR检测结果(8.8％和12.5％)。5例痰液标本PCR首检阳性而GMS染色阴性患者，采集BAL标本进行GMS复检染色结果均转为阳性。24例呼吸道标本GMS染色阴性但PCR检测阳性患者中，19例患者经临床诊断为PCP。28例经GMS染色确诊的PCP患者接受短期抗p.j治疗后PCR复检阳性率为39.3％，GMS复检阳性率为17.9％。以p.jDHPS基因中75bp的特异性片段为目标基因建立的荧光定量PCR检测方法，标准曲线r2=0.998，灵敏度为2.2×101拷贝/μl；185例临床送检PCP诊断标本中，荧光定量PCR阳性率93.5％，显著高于GMS染色和常规PCR(29.7％和47.6％P103/μl的病例分别占78％(43/55)，23.8％(31/130)和7.4％(6/81)，正常成人组未发现DHPS拷贝数>103≥μl的个体。若以肺孢子菌DHPS拷贝数≥103/μl作为判断显性PCP感染Cutoff值，在临床确诊PCP组，荧光定量PCR敏感性达到87.3％，特异性为100％。对31例疑似PCP患者中肺孢子菌DNA拷贝数≥103/μl患者临床资料进行回顾性调查发现，接受抗p.j药物治疗的18例患者临床症状明显缓解，死亡率为11.1％，显著低于未接受抗p.j药物治疗的13例患者(23.1％)。
结论：常规PCR方法从非艾滋病PCP患者痰液标本检出p.j的敏感性明显高于GMS染色，与支气管灌洗液标本检测结果具有良好的相关性，适用于高危人群PCP筛检。建立的荧光定量PCR方法可特异、快速、灵敏地对p.j进行定量检测，肺孢子菌DHPS基因拷贝数≥103/μl可初步作为区分显性和隐性肺孢子菌感染的阈值。