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背景及目的: 细胞红蛋白(Cygb)是与肌红蛋白(Mb),血红蛋白(Hb),脑红蛋白(Ngb)属于同一家族的第四种携氧球蛋白,具有携氧、贮氧、氧感受器、清道夫的功能。体内实验证明 Cygb在脑特定区域神经细胞的细胞质和细胞核都有分布,且在缺氧情况下表达上调,可增加脑组织对缺氧的耐受能力,抵抗氧化应激所致损伤。新生儿缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic-Ischemic Brain Damage,HIBD)是一种由围生期各种缺氧、缺血所致的发病率、致残率高的脑部疾病。Cygb的发现为 HIBD的脑保护作用研究提供了新的线索。本研究探在Cygb在体外培养的胎鼠皮质神经元缺氧后24小时内的表达变化规律,为研究细胞红蛋白在缺氧应激神经细胞中的调节通路提供实验基础,从而进一步为缺氧缺血性脑病中的治疗奠定基础。 材料和方法: 1.用含2%L-GLUTAMINE、2%B27神经营养因子、96%NEUROBASAL、100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的NEUROBASAL培养基培养孕18天SD胎鼠大脑皮层神经元,培育至第六天时培养用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组织化学方法神经细胞进行纯度鉴定。 2.细胞缺氧:将纯度达标的神经细胞随机分为4组,其中1组作为正常组(0小时),其余3组分别缺氧8小时,16小时,24小时,缺氧后用测氧仪监测气体的氧浓度,氧气浓度在0-0.9%之间方可进行下一步实验。 3.用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)检测各组神经细胞的生存率。 4.用实时荧光定量 PCR技术(Real-timePCR)检测细胞红蛋白在对照组(0小时)及缺氧组(8小时,16小时,24小时)核酸的表达情况。 5.用蛋白印迹法(Westernblot)检测细胞红蛋白在对照组(0小时)及缺氧组(8小时,16小时,24小时)蛋白的表达情况。 6.数据统计:多组计量资料采用单因素方差分析,两两比较采用 LSD检验。P
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