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猪繁殖与呼吸综合征是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的病毒性传染病,主要导致妊娠母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍和仔猪的大量死亡。该病至今尚无有效的治疗方法,疫苗预防是主要的措施。疫苗的研究已取得显著进展,世界上商品化的PRRS疫苗有灭活疫苗和弱毒活疫苗两类。临床上PRRS疫苗主要存在的问题是：第一,疫苗产生免疫反应需要较长时间；其次,PRRSV疫苗并不具备完全的保护力,尤其是灭活疫苗不能激发细胞免疫；第三,PRRSV弱毒疫苗可以在免疫猪体组织中存在几周时间,并且从注苗猪向易感猪传播。因此,应用灭活疫苗增强疫苗免疫效力和安全性,研制免疫增强剂来提高PRRS灭活疫苗的免疫效果具有显著优势。大量研究表明,黄芪多糖和白花蛇舌草多糖具有显著的免疫增强作用,作为免疫增强剂有显著优势。本试验选取黄芪多糖和白花蛇舌草多糖联合PRRS灭活疫苗免疫仔猪,观察其联合应用对疫苗免疫效果的影响,研究其免疫增强作用和机理,旨在筛选具有较好免疫增强作用的单味或复合中药成分,为研制免疫增强剂提供理论依据。试验分为以下六部分：试验Ⅰ、黄芪多糖和白花蛇舌草多糖提取及含量测定提取黄芪多糖(APS)和白花蛇舌草多糖(OPS),为下一步研究多糖的活性及筛选具有较好免疫增强作用的单味或复合中药成分,本试验进行APS和OPS的提取及其含量的测定。采用水提醇沉法提取多糖,苯酚-硫酸法测定多糖含量。结果表明,黄芪多糖和白花蛇舌草多糖的提取率分别为21.69%、13.58%,净含量分别为44.61%、27.25%。试验Ⅱ、黄芪多糖和白花蛇舌草多糖的体外筛选试验本试验通过黄芪多糖和白花蛇舌草多糖对小鼠脾脏淋巴细胞增殖的影响,筛选具有较好免疫增强作用的单味或复合中药成分。采用MTT法比较黄芪多糖、白花蛇舌草多糖以及黄芪多糖联合白花蛇舌草多糖直接作用以及协同ConA或LPS促进体外培养小鼠脾脏淋巴细胞的增殖作用。结果表明,APS和OPS均能促进淋巴细胞增殖,而且APS和OPS在一定浓度既能单独又能协同ConA或LPS刺激淋巴细胞增殖,OPS作用较强,并且APS和OPS联合作用与OPS单独作用效果差异不显著。试验Ⅲ、黄芪多糖和白花蛇舌草多糖对PRRS灭活疫苗对免疫效果的影响本试验通过观察PRRS抗体水平的动态变化,研究黄芪多糖和白花蛇舌草多糖与PRRS灭活疫苗联合应用对仔猪免疫效果的影响。20头(26±1)日龄PRRS检测阴性猪随机分成5组,所有猪均注射猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗,同时试验组分别肌肉注射高、中、低剂量白花蛇舌草多糖和黄芪多糖,空白对照组注射等剂量生理盐水,每天1次,连续3 d。分别在注射疫苗后7、14、24、34、44、54、69 d前腔静脉采血。ELISA方法测定抗体。结果表明,APS和OPS均能提高PRRSV灭活疫苗免疫后小猪血清中抗体水平,促进抗体提前达到峰值,OPS各组抗体水平维持时间要优于对照组和APS试验组,OPS中剂量组免疫增强作用优于低剂量组和高剂量组。试验Ⅳ、黄芪多糖和白花蛇舌草多糖对猪外周血淋巴细胞增殖影响本试验通过观察猪外周血淋巴细胞增殖的影响,探讨黄芪多糖和白花蛇舌草多糖联合猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗增强免疫作用机理。试验动物处理同试验Ⅲ.MTT法测定外周血淋巴细胞增殖。结果表明,无论ConA、LPS刺激APS和OPS,还是APS和OPS直接作用均能显著促外周血淋巴细胞增殖：OPS中剂量组>OPS高剂量组>APS组>生理盐水组。试验V、黄芪多糖和白花蛇舌草多糖对PRRS灭活疫苗免疫后T细胞亚群的影响本试验通过观察仔猪免疫后T细胞亚群动态变化,探讨黄芪多糖和白花蛇舌草多糖联合猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗增强免疫作用机理。试验动物处理同试验Ⅲ。通过流式细胞仪检测猪外周血CD3+、CD4+、CD8+细胞百分数。结果表明,APS和OPS均能显著提高仔猪的CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞的百分数；OPS中剂量组CD4+/CD8+比值极显著高于生理盐水和APS组(P<0.01),表明黄芪多糖和白花蛇舌草多糖均能提高机体细胞免疫力,但提高机体免疫力则与剂量有关。试验Ⅵ、黄芪多糖和白花蛇舌草多糖对PRRS灭活疫苗免疫后IL-2和IFN-γ的影响本试验通过观察仔猪免疫后IL-2和IFN-γ动态变化水平,探讨黄芪多糖和白花蛇舌草多糖联合猪繁殖与呼吸综合征灭活疫苗增强免疫作用机理。试验动物处理同试验Ⅲ。定量ELASA法测定IL-2, IFN-γ。IL-2检测结果表明,生理盐水组、APS组、OPS低、中剂量组IL-2水平呈现先降低后升高趋势,OPS高剂量组呈现一直升高趋势。IFN-γ呈检测结果表明,联合注射疫苗和多糖后IFN-γ表达先下降后上升到24 d时达到最高值后又降低。说明APS和OPS可通过调节机体内细胞因子的表达来提高机体免疫。