黄瓜果瘤基因Tu的遗传转化研究及黄瓜无侧枝基因nlb的初步定位

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本实验室通过前面的研究,利用图位克隆的方法克隆得到控制黄瓜果瘤性状的基因Tu,且发现Tu基因的完全缺失导致无果瘤性状的发生。生物信息学软件预测该基因编码锌指蛋白(zinc finger protein)转录因子,为了进一步验证Tu基因的生物学功能,探究该转录因子在黄瓜转录调控中的重要作用,故对其进行黄瓜遗传转化研究。以黄瓜无果瘤品系S06苗龄子叶节为外植体,构建含有黄瓜自身启动子的黄瓜果瘤基因Tu表达载体pCAMBIA2301-Tu,将表达载体通过点击法导入根癌农杆菌菌株GV3101中,进行农杆菌介导的黄瓜果瘤基因Tu的遗传转化研究。通过优化遗传转化的生根条件以及抑制农杆菌生长条件等,将生根培养中卡那霉素(Kan)浓度调至30mg/L,抑制农杆菌生长抗生素为特美汀(Ti)150mg/L+头孢霉素(Cef)100mg/L时,一定程度上提高了遗传转化的效率。580个外植体通过抗生素筛选获得的18株再生苗,通过PCR检测和测序鉴定,最终获得8株转化苗,转化效率为1.37%。以黄瓜(Cucumis sativus L.)无侧枝品系419(P1)和长侧枝品系SB-2(P2)为亲本,构建136株F2群体为试验材料,对黄瓜无侧枝基因nlb进行基因定位研究。田间调查和遗传分析发现F2群体的表现型为长侧枝与无侧枝,χ2(χ2=0.04<3.84)检验表明其分离比为3∶1。运用分离群体分组混合分析法(bulked segregant analysis, BSA),从F2中无侧枝群体和长侧枝群体中随机选取10株,分别混合其DNA,构建无侧枝和有侧枝基因池,通过分析SSR分子标记在基因池间的多态性,定位到nlb基因连锁标记SSR10018,将nlb定位于黄瓜第一染色体。然后利用F2群体进行进一步验证,经MAPMAKER3.0软件分析,定位到距nlb基因更加紧密的分子标记SSR19673,遗传距离为15.9cM。本研究为无侧枝基因nlb的精细定位和图位克隆提供良好的研究基础。
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