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目的:我国女性生殖系统最常见的恶性肿瘤是宫颈癌。其在女性恶性疾病的新发病率、死亡率均居第二位，仅次于乳腺癌[1]。目前宫颈癌的治疗，早期宫颈癌以手术为主，放化疗为辅，晚期宫颈癌以放疗为主。近些年，随着宫颈癌筛查的普及，全球宫颈癌的发病率呈下降趋势，但局部增长和年轻化趋势的问题仍存在。由于晚期和复发宫颈癌对放疗、化疗不敏感，才致其5年生存率明显降低。宫颈癌干细胞理论认为由于宫颈癌干细胞对放疗、化疗不敏感，才导致肿瘤复发和转移。 本研究前期实验发现耐放疗宫颈癌Siha细胞系中CD44+CD24+细胞在总细胞中所占比例较未放疗者明显增高，进一步探讨CD44+/CD24+Siha细胞对顺铂耐药性研究及其表面肿瘤干细胞表面标志物分子Oct4、ABCG2的表达情况，以明确CD44+/CD24+Siha细胞具有抵抗顺铂引起的细胞凋亡和高表达Oct4、ABCG2肿瘤干细胞表面标志物，为后续探究CD44+/CD24+Siha细胞是否具有宫颈癌干细胞特性的实验奠定基础。 方法: 1细胞培养:含10％胎牛血清、100 U/ml青霉素和100μ g/ml链霉素的RPMI1640培养基，于5％CO2培养箱中37℃培养，以胰蛋白酶-EDTA消化液消化细胞传代，取处于对数生长期的细胞用于实验。 2采用流式荧光激活细胞分选仪分选CD44+/CD24+ Siha细胞:取对数生长期的Siha细胞，制备成单细胞悬液，利用抗CD44-PE抗体和抗CD24-FITC抗体采用流式荧光激活细胞分选仪(fluorescence-activated cellsorting，FACS)分选出CD44+/CD24+ Siha细胞。 3 MTT法检测不同浓度顺铂作用于CD44+/CD24+Siha细胞24h时的体外增殖情况:将流式仪分选的CD44+/CD24+Siha细胞作为实验组，亲代Siha细胞作为对照组，在两组细胞中分别加入不同浓度顺铂(0、0.1、1、5、10、15、20μ g/mL)，作用24h后，采用MTT法检测细胞体外增殖情况，并计算细胞的药物IC50值。 4流式细胞仪检测10μ g/mL顺铂作用于CD44+/CD24+Siha细胞24h、48h、72h时的细胞凋亡率情况:将流式仪分选的CD44+/CD24+Siha细胞作为实验组，亲代Siha细胞作为对照组，10 g/mL顺铂分别加入两组细胞中，均在5％CO2恒温箱中培养24h、48h、72h时，采用流式细胞仪检测细胞凋亡率的情况。 5 RT-PCR技术检测 CD44+/CD24+Siha细胞中Bcl-2、 Oct-4、ABCG2mRNA的表达情况:将采用流式细胞仪分选的CD44+/CD24+Siha细胞作为实验组，亲代Siha细胞作为对照组，采用RT-PCR技术检测两组细胞中Bcl-2、Oct-4、ABCG2mRNA的表达情况。 6 Western技术检测CD44+/CD24+ Siha细胞中Bcl-2、Oct-4、ABCG蛋白的表达情况:将采用流式仪分选的CD44+/CD24+ Siha细胞作为实验组，亲代Siha细胞作为对照组，采用Western技术检测两组细胞中Bcl-2、Oct-4、ABCG2蛋白的表达情况。 7统计学方法:采用SPSS21.0统计软件，计量资料以“(x)±s”表示，两样本均数比较，两总体方差相等用Levenes Test，方差不等用t检验，各组间多个均数比较用单因素方差分析，a=0.05为检验水准，P＜0.05时有显著性差异。 结果: 1 MTT法检测得出不同浓度顺铂(0.1、1、5、10、15、20μ g/mL)作用于CD44+/CD24+Siha细胞24h细胞存活率分别是92.87±1.50％、84.72±1.09％、75.13±2.86％、65.79±2.71％、52.10±0.52％、48.84±1.02％，各组之间比较，差异有统计学意义(P＜0.01);作用于亲代Siha细胞24h时的细胞存活率分别是88.42±1.51％、79.94±1.05％、69.78±0.81％、58.97±0.70％、49.60±0.88％、45.13±0.69％，各组之间比较，差异有统计学意义(P＜0.01); CD44+/CD24+Siha细胞的IC50值为24.366，亲代Siha细胞的IC50值为18.644，两组间差异明显。 210ug/ml顺铂作用于CD44+/CD24+Siha细胞和亲代Siha细胞24h时细胞凋亡率分别为3.05±0.16％、5.17±0.27％，两组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05);48h时细胞凋亡率分别为17.94±2.02％、32.60±4.28％，两组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05);72h时细胞凋亡率分别为40.14±3.01％、56.62±5.32％，两组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。 3 RT-PCR技术检测到CD44+/CD24+Siha细胞和亲代Siha细胞中Bcl-2 mRNA的相对表达量分别是34.34±5.25、2.23±0.16，两组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05);Oct-4mRNA的相对表达量分别是30.16±6.35、2.79±0.75，两组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05);ABCG2mRNA的相对表达量分别是41.26±7.23、4.23±1.12，两组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。 4 Western技术检测测CD44+/CD24+Siha细胞、亲代Siha细胞中Oct-4、ABCG2、Bcl-2蛋白的表达情况，两组细胞间比较差异明显。 结论: 1 CD44+/CD24+Siha细胞可以抵抗顺铂诱导的细胞凋亡。 2 CD44+/CD24+Siha细胞高表达抑制凋亡因子Bcl-2和肿瘤干细胞表面标志物Oct-4、ABCG2。 3 CD44+/CD24+Siha细胞具有部分肿瘤干细胞样特性。