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吡啶甲酸铬是一种应用很普遍的营养补充剂和饲用添加剂,但其安全性一直存在争议。本研究通过体外细胞培养试验和动物饲养试验来研究吡啶甲酸铬对生长育肥猪是否存在氧化损伤效果。
试验包含两部分:
(1)体外细胞培养试验。选用3日龄新生仔猪作为细胞供体,用剪切消化法分离出肝细胞,再用含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养。48小时后,分别用含有0、8、200和400μM吡啶甲酸的培养液处理细胞48小时,研究吡啶甲酸铬对细胞内活性氧(ROS)的水平、丙二醛(MDA)的含量以及细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性的影响。
(2)动物饲养试验。30头65日龄,体重为(30±1)kg的二元杂交型(大×长)生长肥育猪按性别相同、体重相似、遗传基础相同的原则随机分成5组,每组6各重复,每个重复1头猪。试验周期为80天,5个处理分别饲喂铬的添加水平为0、200、800、1600、3200μg/kg(以吡啶甲酸铬的形式添加)的日粮来研究吡啶甲酸铬对试验第35天、80天时动物血清中超氧化物歧化酶(SOD),过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力和MDA的含量,以及试验第35天、80天时动物尿液中8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的水平。试验结束时,试验动物被屠宰并采集肝脏和肾脏样品分别测定这些组织中的SOD、GSH-Px、CAT的活力和MDA的水平。
试验结果表明:在细胞培养试验中,各处理组与对照组相比,细胞内ROS水平和培养基中LDH的活力无显著差异(p>0.05),但是8μM吡啶甲酸处理组中的MDA含量显著降低(p<0.05);相关性分析及趋势分析结果表明,ROS分别与MDA、LDH显著线性正相关(p<0.05),同时MDA与LDH也显著线性正相关(p<0.05),相关系数分别为0.609,0.614,0.689;随着吡啶甲酸铬添加水平的升高,ROS、LDH分别呈显著先下降后上升的二次曲线型变化趋势(p<0.05)。
在动物饲养试验中,日粮中添加吡啶甲酸铬对各处理组动物在试验第35天、80天血清中的SOD,GSH-Px,CAT活力和MDA的含量无显著影响(p>0.05)。同时,在试验第35天、80天时,各处理组动物尿液中的8-OHdG水平也没有随着吡啶甲酸铬添加水平而发生显著变化(p>0.05)。与对照组相比,各处理组动物的肝脏和肾脏中的的SOD、GSH-Px、CAT活力和MDA的含量也无显著差异(p>0.05)。
由此可得以下结论,体外条件下适量的吡啶甲酸铬能抑制细胞内脂质过氧化物的生成,增强肝细胞的抗氧化能力,但是这种效果并不具有量效果关系,当吡啶甲酸铬的添加剂量过高时这种抗氧化效果不明显。在活体试验条件下,吡啶甲酸铬没有明显的抗氧化效果,长期添加高剂量吡啶甲酸铬不会破坏动物体内氧化和抗氧化体系的平衡,也不会导致肝脏和肾脏的脂质过氧化损伤和NDA氧化损伤。