小鼠肝再生蛋白表达谱分析

• 作 者: 俞炯
• 机 构: 温州医科大学
• 出 处: 温州医学院 温州医科大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 肝切除 肝再生 蛋白表达 影响因子

目的：本研究拟采用聚丙烯酰氨凝胶电泳结合质谱技术，检测在肝切除小鼠中肝脏再生过程中的蛋白质进行分析比较，寻找肝脏再生过程中出现的表达差异蛋白，来获取肝脏再生的影响因子，从而对肝脏的再生机制进行初步探讨。
方法：实验组分成3组：正常对照组、肝切除后1天组、肝切除后3天组。取小鼠部分肝切除肝组织标本各2例，通过组织裂解液抽提肝脏总蛋白，经过蛋白纯化，用BCA蛋白定量方法测定样品浓度，经过SDS-PAGE，将胶切成等分的19条，胶内酶解，用nanoLC-nanospray-Q-TOF质谱分析，利用互联网上的蛋白数据库：ipi.mouse.v3.40，用Proteinlynx2.3软件对检测到的蛋白进行定性和相对定量分析。再借助http://hup0.0rg.cn/的软件检索蛋白质功能。
结果：在空白对照中检测到247种蛋白，肝切除1天检测到347种，肝切除3天为251种蛋白，通过Proteinlynx2.3软件对检测到的蛋白进行定量和定性分析发现：肝切除后1天组与正常对照组相比，手术组比正常对照组新增141种蛋白质，其中与细胞生物过程相关的蛋白为90种，与细胞组成相关的蛋白为77种，与细胞功能相关的蛋白为99种；肝切除后1天组和正常对照组相比，缺失蛋白质20种，其中与细胞生物过程相关的蛋白为11种，与细胞组成相关的蛋白为13种，与细胞功能相关蛋白为12种；肝切除后1天组和正常对照组相比，表达上调的蛋白质有42种并有显著性差异(0.95≤p≤1)，其中与生物学过程相关的蛋白为27种，与细胞组成相关的蛋白为24种，与细胞功能相关的蛋白为30种；肝切除后1天组和与正常对照组对比下调的蛋白有35种并有显著性差异(0≤p≤0.05)，其中与细胞生物过程相关的蛋白为23种，与细胞组成相关蛋白为21种，与细胞功能相关的蛋白为26种。
结论：采用超高效液相色谱和Q-Tof质谱技术，建立了nano-UPLC-Q-Tof技术分析肝蛋白质组的研究平台，借助于Proteinlynx2.3软件可很好地实现对蛋白进行鉴定和相对定量分析，再通过http://hup0.0rg.cn/的软件对可进行功能对蛋白质组研究。
我们应用SDS-PAGE、液相串联质谱联用的方法研究了肝再生过程中蛋白表达谱的差异，结果发现多种蛋白的表达改变与肝再生相关。为肝脏蛋白质组学研究奠定了实验基础。