论文部分内容阅读
实验目的:本实验室在世界上首先克隆出狗SDF-1基因,并在GenBank上注册(GenBankNo.AH014147)。在此基础上,本实验进一步研究SDF-1基因在狗体内各种组织的表达分布情况,以及急性心肌梗死后体内SDF-1基因表达的动态变化规律,为阐明SDF-1在急性心肌梗死发病中的意义和应用SDF-1进行心肌梗死的基因治疗奠定基础。
实验方法:13只杂种狗,随机选取3只,麻醉处死后取心脏,肝脏,脾脏,肺,脑,肌肉,肾脏,肠,生殖腺等全身各组织。分别采用real-timePCR的方法和westernblot的方法检测SDF-1在各种组织中SDF-1mRNA和蛋白水平上的表达情况。随机选取8只狗,结扎左冠状动脉前降支制备AMI模型,作为心肌梗死组(MI组);另设假手术组(S组,n=2),进行同样的开胸操作,但不结扎冠状动脉;MI组再按观察时间点随机分为2小时,7天和4周三个亚组,即:MI2h组,MI7d和MI4w组,S组。到达指定观察天数,分别取骨髓,血液,心肌梗死区心肌组织和周围正常心肌组织。使用ELISA方法检测骨髓和血液中SDF-1蛋白水平,使用real-timePCR和westernblot的方法检测心肌内的SDF-1表达水平。
结论:在所选取的正常狗的各种组织中都有SDF-1的表达,提示正常情况下SDF-1在体内发挥着广泛而重要的生物学作用。急性心肌梗死后,血液和骨髓中的SDF-1蛋白在2小时即上升,7天时降低并回归到与正常对照,即与假手术组相似的水平。4周时其表达水平继续下降,低于正常对照。这种动态变化可能与干细胞的动员相关。急性心肌梗死2小时后心肌梗死区与周围正常心肌区的SDF-1表达水平皆下降,但周围正常心肌区较心肌梗死区下降程度更大,而使心肌梗死区的SDF-1表达水平显著高于周围正常心肌。心肌梗死后7天,正常心肌区SDF-1的表达开始上升,而心肌梗死区继续下降,导致周围正常心肌区的SDF-1表达水平高于心肌梗死区。至心肌梗死后4周,正常心肌区与心肌梗死区SDF-1的表达都开始上升,心肌梗死区SDF-1mRNA水平仍然低于周围正常心肌,但蛋白表达水平则高于周围正常心肌。这种动态变化为SDF-1在急性心肌梗死心脏细胞治疗中的应用提供了新的参考数据。