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胰腺癌是一种恶性程度极高，预后极差的恶性肿瘤。美国的统计结果显示，由癌症引发的死亡中，胰腺癌排第四位，5年生存率只有5％-6％。除传统手术治疗外，吉西他滨化疗是治疗胰腺癌的主要辅助手段。但应用吉西他滨对病人实行化疗在提高生存率方面仅有轻微的作用，胰腺癌病人的病情仍在不断恶化，这主要是由肿瘤先天或者获得性的耐药机制导致的，尤其是获得性耐药，然而目前在其他肿瘤中发现的耐药机制可能不是导致胰腺癌高水平耐药的主要原因。因此寻找新的胰腺癌耐药机制对于胰腺癌的治疗非常重要。近些年已经有一些研究把抗凋亡PI3K/Akt信号通路和胰腺癌细胞系的耐药性联系到了一起;乳腺癌耐药蛋白(BCRP/ABCG2)也被发现可能在多种肿瘤中与肿瘤产生耐药性相关。 目的:探究PI3K/Akt信号通路与ABCG2跨膜转运蛋白在胰腺癌细胞产生吉西他滨(Gem)耐药性过程中的影响及其作用机制。 方法:本实验首先通过免疫组化的方法检测跨膜转运蛋白ABCG2在胰腺癌组织及癌旁组织的表达情况。三株胰腺癌细胞系SW1990、Capan-2、PANC-1通过CCK-8的方法检测其对吉西他滨的耐药性，用生存率及半数抑制浓度(IC50)表示。通过免疫印迹的方式检测三株细胞ABCG2蛋白总量的表达差异以及经Gem处理以后P-Akt、P-Paxillin表达量的改变，流式细胞方法检测用化疗药后细胞表面ABCG2表达量的改变。随后用LY294002作为PI3K/Akt信号通路抑制剂，外源阻断该通路以及用siRNA内源沉默Akt2基因后检测三株细胞系使用Gem处理后的生存率、细胞表面ABCG2以及总蛋白ABCG2表达变化。最终通过免疫荧光共聚焦技术检测PI3K/Akt信号通路影响ABCG2蛋白导致胰腺癌细胞产生对Gem耐药的分子机制。 结果:ABCG2在胰腺癌组织及癌旁组织高表达，且在癌组织表达量高于癌旁组织。三株胰腺癌细胞系SW1990、Capan-2、PANC-1的耐药性不同，PANC-1IC50值最高，SW1990最低，与ABCG2蛋白细胞膜表达水平一致，而ABCG2总蛋白表达水平却为Capan-2最高，PANC-1最低，而且三株细胞系膜表面ABCG2表达水平均随着Gem处理时间的增长而增加。使用Gem处理细胞后，细胞内P-Akt、P-Paxillin表达量上升。LY294002抑制PI3K/Akt信号通路以及siRNA内源沉默Akt2后细胞对于Gem的耐受性降低，细胞膜表面ABCG2表达水平较单独Gem处理组降低，而ABCG2总蛋白表达量不变。免疫荧光共聚焦结果显示ABCG2特异性定位于细胞质与细胞膜，使用Gem处理细胞后细胞膜表面ABCG2表达量上升，LY294002预处理后ABCG2定位发生明显改变，由细胞膜向细胞质转移。 结论:在体外细胞水平，胰腺癌细胞对吉西他滨耐药性差异较大，且差异性与细胞膜表面ABCG2表达水平相关与ABCG2总蛋白表达水平无直接关系;抑制PI3K/Akt信号通路可以一定程度上增强胰腺癌细胞化疗敏感性;PI3K/Akt信号通路可能通过改变ABCG2蛋白定位情况调节胰腺癌细胞对Gem耐受性。PI3K/Akt信号通路以及ABCG2蛋白可能成为新的治疗靶点以增强胰腺癌细胞对化疗药物的敏感性。