论文部分内容阅读
开花是高等植物从营养生长向生殖生长转变的重要生理过程。OsFT-LIKE基因家族在水稻成花诱导中具有重要作用。本实验室前期的研究发现,p35S∷FT11∶GFP、pFT11∷FT11∶GFP晚花明显,转基因植株植株高大,茎秆粗壮,所结稻穗分支及穗粒增多。基于以上发现,本论文对不同启动子和融合蛋白对OsFTL11增加水稻产量的影响进行了初步研究,主要研究结果如下: 1、构建了3个与OsFTL11蛋白融合的超表达载体:p35S∷ FT11∶01g、p35S∷FT11∶05g、p35S∷ FT11∶02g;克隆出水稻中4个在旗叶期高表达的启动子和4个在幼穗期间高表达的启动子,并用这8个不同启动子构建了指导OsFTL11∶GFP表达载体:pF1∷ FT11∶GFP、pF2∷ FT11∶GFP、pF3∷ FT11∶GFP、pF4∷ FT11∶GFP、pP1∷ FT11∶GFP、pP2∷ FT11∶GFP、pP3∷ FT11∶GFP、pP4∷FT11∶GFP,获得上述载体的转基因水稻,并分别对其T0,T1代进行分子鉴定。 2、对超表达OsFTL11融合蛋白的转基因水稻的表型观察发现:p35S∷FT11∶01g,p35S∷ FT11∶05g和p35S∷ FT11∶02g转基因植株主要表现为矮化、多分蘖,株高为野生型的一半,分蘖数却增加了一倍,开花推迟2周左右,结实率低。p35S∷FT11∶01g和p35S∷ FT11∶05g中部分T0代转基因株表型与野生型类似,经检测为转基因沉默株系。 3、半定量RT-PCR检测了35S∷ FT11∶01g、p35S∷ FT11∶05g、p35S∷FT11∶02g转基因水稻中与开花调控网络基因的表达量,发现矮化植株的Ghd7表达量明显上升,而转基因沉默植株中Ghd7表达量与WT基本一致;超表达株系中OsRCN2, OsMADS14,OsMADS15的表达量与野生型相比没有明显的变化。 4、对不同启动子下FT11∶EGFP转基因水稻的表型的初步观察发现:不同启动子指导下FT11∶EGFP表达对水稻株型并未发生显著影响,株高,分蘖等与野生型基本一致,但开花时间推迟。 5、初步研究了生物素化用于检测水稻中蛋白之间相互作用的可行性:利用重叠延伸法将大肠杆菌生物素化酶BirA定点突变,并在水稻原生质体中进行超表达。Western-blot分析发现其可以将水稻中的蛋白生物素化。