人羊膜细胞具有向心肌样细胞分化的特性

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目的:心肌成形术(CCM)为治疗因心肌细胞受损而导致的心脏功能衰退提供了理想的途径。人羊膜细胞可能成为CCM的细胞来源。然而,人羊膜细胞中的上皮细胞(hAECs)和间充质细胞(hAMCs)向心肌细胞的分化潜能及其体外诱导的影响因素均尚待进一步探讨。本研究试图通过体外诱导分化实验,以评价hAECs和hAMCs向心肌细胞分化的能力,为人羊膜细胞作为CCM的细胞来源提供实验依据。 方法:①采用胰蛋白酶一胶原酶分离法分离hAECs和hAMCs,用流式细胞仪(FCM)进行表型鉴定。②hAECs和hAMCs均用10μmol/L 5-氮杂胞苷(5-aza)诱导24h,随后hAECs用含抗坏血酸磷酸盐和5%胎牛血清的培养基继续培养;而hAMCs用含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和5%胎牛血清的培养基继续培养。③分别取诱导后第12d的hAECs和诱导后第8d的hAMCs,采用RT-PCR检测心肌特异性转录因子Nkx2.5和GATA-4 mRNA的表达。④取诱导后2周、4周的hAECs和hAMCs,用免疫荧光染色法检测肌细胞特异蛋白α-辅肌动蛋白和结蛋白的表达。 结果:①通过胰蛋白酶和胶原酶消化可分离较高丰度的人羊膜细胞,每份羊膜可获得5.01×10<7>hAECs和6.30×10<7>hAMCs;FCM分析显示hAECs几乎不表达CD44,而hAMCs中有26.6%表达CD44。②hAECs经5-aza和抗坏血酸诱导后,表达肌系细胞标志结蛋白和α-辅肌动蛋白,有心肌特异性转录因子Nkx2.5和GATA-4的mRNA的表达。③hAMCs经5-氮杂胞苷和bFGF诱导后,表达结蛋白、α-辅肌动蛋白、GATA-4和Nkx2.5。 结论:①胰蛋白酶—胶原酶分离法可获得高丰度的hAECs和hAMCs。②hAECs和hAMCs均具有向心肌样细胞分化的能力,可望成为CCM的候选细胞。
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