基于乙肝核心抗原的治疗性疫苗研究

• 作 者: 邓楠
• 机 构: 南开大学
• 出 处: 南开大学
• 发表日期: 2007年期
• 关键词: 乙型肝炎病毒 治疗性疫苗 中国恒河猴 ELIspot 核心抗原 特异性免疫

乙型肝炎感染是世界特别是我国最重要的公国卫生问题之一，严重的威胁着人们的健康。对于乙型肝炎的慢性感染尚无令人满意的治疗措施。大量证据证明，HBV特异性的细胞免疫反应在HBV清除过程中起了关键性的作用。因此我们假设，如果我们可以激起机体的HBV特异性免疫反应，就可以有助于病毒的清除以及病人的康复。炭疽毒素致死因子N末端(LFn)具有将与其融合的抗原投递之MHC Ⅰ类和MHC Ⅱ类途径中的功能，并继而激发起特异性免疫反应的功能。我们利用这一特性，将HBcAg与LFn融合，研究该融合蛋白是否能激起针对HBcAg特异性免疫反应。
本论文构建表达并纯了LFn与HBcAg的融合蛋白，并在尾部加入一个本实验室前期发现的一个可以被中国恒河猴限制的表位GDLEITTHSF。
使用LFcE蛋白并配合不同佐剂免疫Balb/c小鼠，实验结果表明LFcE与PCPP佐剂相互配合可以激发HBcAg特异性的细胞免疫反应。
认为曾所加表位可能被MamuB*40或者MamuB*67基因型的MHC分子所限制，因此使用PCR-SSP方法对200余只中国恒河猴进行了Mamu基因分型。得到6只具有MamuB*40基因型的中国恒河猴、15只具有MamuB*67基因型的中国恒河猴，其中3只同时具有上述两种基因型。
使用PCPP佐剂配合LFcE免疫选定的恒河猴。发现所有结果有效的实验组恒河猴均对LFcE蛋白产生应答。而所有恒河猴都不能对新加入的表位GDLEITTHSF产生应答。另外，发现了两个表位。其中，GELMTLATW曾经被报道可以被印度恒河猴所限制，而SFLPSDFFPSI是新发现的表位。我们也发现这对于两个表位的免疫应答具有完全不同的动力学曲线。
使用测序的方法对3只恒河猴进行了Mamu基因分型，发现这三只中国恒河猴的Mamu基因与印度恒河猴Mamu基因差别较大。在分到20个型中，发现了4个新的基因型，以及12个新基因亚型。分析后我们认为SFLPSDFFPSI极有可能被MamuA1*2803所限制，但也不排除被MamuB*68的两个亚型MamuB*6803以及MamuB*6804共同限制的可能性。