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目的：
组织工程阴茎海绵体的构建为阴茎缺损的修复提供了新的选择。可靠的种子细胞、支架及种子细胞与支架的粘附是组织工程主要内容，本实验以preplate技术分离昆明小鼠肌源性干细胞，并鉴定其细胞表型，为组织工程种子细胞提供又一选择，同时以新西兰白兔肌源性干细胞为种子细胞，兔脱细胞阴茎海绵体为支架，探索促进二者粘附的因素，以纤维连接蛋白(Fibronectin，Fn)为重点。
材料与方法：
1.实验动物：
昆明小鼠，1周龄；新西兰大白兔，雌雄不限，体重1.5～2.0Kg，月龄1～1.5个月。
2.实验试剂与器材：
X Ⅰ型胶原酶；马血清(HS)、DMEM-LG、Trypsin；dispase：胎牛血清；氨水；Triton-X100：DMSO；MTT；牛血清白蛋白(BSA)；显微外科手术器械、紫外分光光度计、流式细胞仪等。
3.昆明小鼠肌源性干细胞的分离与鉴定利用Preplate技术分离MDSC：无菌条件下取得昆明小鼠双后肢肌肉并剪成肉泥，依次使用Ⅺ型胶原酶、dispase及胰酶对组织进行消化，得到的细胞悬液接种入培养瓶，此为PP1；细胞培养箱中孵育2小时后将PP1中的悬液转移至经胶原包被的培养瓶，此为PP2；随后每24小时将悬液转移至胶原包被的培养瓶，此为PP3～PP6。收集PP6细胞，利用流式细胞仪(FCM)检测其desmin、CD45及Bcl-2阳性细胞的百分数；利用免疫细胞化学检测desmin、Bcl-2表达。
4.新西兰兔MDSC的分离培养及脱细胞阴茎海绵体基质的制备：
利用Preplate技术分离MDSC，利用流式细胞仪(FCM)检测其desmin、CD45及Bcl-2阳性细胞的百分数，符合MDSC表型，培养作为种子细胞。取健康成年雄性新西兰兔完整阴茎海绵体组织，以Triton-X 100与NH3·H2O混合液进行萃取脱细胞处理。处理后脱细胞阴茎海绵体基质质地柔软，标本作病理组织HE染色，镜下可见主要成份为胶原及弹性纤维，且排列规则，未见细胞成份。利用本实验室已成功的技术流程分离培养MDSC及制备脱细胞阴茎海绵体基质。
5.Fn影响MDSC与脱细胞阴茎海绵体基质粘附的实验研究：
①取3块96孔板分为3组：Fn、BSA及未包被组，前两种蛋白分别包被孔底，未包被组为对照。分4个时点，间隔1h，每孔接种肌源性干细胞5×104个，MTT检测；②无菌条件下将脱细胞阴茎海绵体基质片(约0.5cm2大小)置入12孔板中心，分别予Fn、BSA包被，未包被作为对照组。接种细胞悬液，每片接种细胞数为1×105个，培养第3天取基质片进行细胞计数和MTT检测。
实验结果：
Preplate技术分离的细胞中PP1和PP2贴壁细胞相对较少，PP3开始即有大量的短梭形、圆形或多角形细胞贴壁，这些小体积细胞数量到PP6时增至80％。它们极易融合，生长呈方向性。流式细胞仪检测结果显示PP6细胞的desmin、CD45以及Bcl-2的阳性率平均为82.6％±0.14％、1.03％±0.07％及77.2％±0.11％免疫细胞化学检测可见较多的desmin及Bcl-2阳性细胞。
脱细胞阴茎海绵体基质及分离培养的兔MDSC经检测达到实验要求，可用于实验。各组随着时间的延长，MTT和OD570吸光值增加，组内各时点比较有显著性差异。经Fn包被组其MTT和OD570吸光值在各时点均明显高于预涂BSA组和对照组。BSA组与对照组相比无显著性差异。脱细胞基质进行预处理后再种植肌源性干细胞，经Fn预处理组，其细胞计数、MTT和OD570吸光值明显高于BSA处理组及对照组结论Preplate技术可有效分离昆明小鼠肌源性干细胞。纤维连接蛋白(Fn)可促进肌源性干细胞的聚集及粘附，为进一步构建组织工程化阴茎海绵体奠定了基础。