【摘 要】
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目的:探讨谷氨酰胺(L-glutamine)对体外培养的大鼠视网膜Müller细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。
方法:取出生5～7天大鼠视网膜,胰酶消化制成单细胞悬液,建立稳定的M
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目的:探讨谷氨酰胺(L-glutamine)对体外培养的大鼠视网膜Müller细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。
方法:取出生5～7天大鼠视网膜,胰酶消化制成单细胞悬液,建立稳定的Müller细胞体外培养体系,并用免疫细胞化学法对培养细胞进行鉴定。将体外培养的第4～6代大鼠视网膜Müller细胞随机分为正常对照组、硫酸锌处理组、谷氨酰胺处理组。谷氨酰胺处理组在培养液中分别加入终浓度为8、12、15、20mmol/L的谷氨酰胺。培养6h后,用免疫细胞化学法检测各组细胞内HSP70蛋白的表达,实时定量RT-RCR法检测各组细胞内HSP70mRNA的表达。
结果:成功建立稳定的Müller细胞体外培养体系,95%以上细胞谷氨酰胺合成酶(GS)染色阳性。免疫细胞化学结果显示,正常对照组细胞即有HSP70的少量表达,各浓度谷氨酰胺处理组细胞HSP70的表达量均较正常对照组增加(P＜0.05),并且具有浓度依赖性,最大程度的表达出现在谷氨酰胺15mmol/L组。实时定量RT-RCR结果显示,在正常对照组即有HSP70mRNA的少量表达,各浓度谷氨酰胺处理组HSP70mRNA水平较正常对照组上调(P＜0.05),且具有浓度依赖性,最大程度的表达同样出现在谷氨酰胺15mmol/L组。
结论:正常情况下,体外培养的大鼠视网膜Müller细胞少量表达HSP70。谷氨酰胺能够诱导体外培养的大鼠视网膜Müller细胞高效表达HSP70,并且具有浓度依赖性。
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