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目的： 复方附子口服液是我院临床自拟且长期应用的院内成方制剂，由盐附子、党参、黄芪和麦冬4种药材组成，功能益气养心，滋阴温阳，临床用于缓慢性心律失常之中的窦性心动过缓及病态窦房结综合症的治疗。本文对复方附子口服液中各药味进行薄层色谱鉴别、主要成分含量测定及血药浓度测定研究，研究工作有助于对口服液的质量、安全性进行有效监管，确保复方附子口服液的临床治疗效果和患者用药安全。 方法： 复方附子口服液的薄层色谱鉴别 采用薄层色谱法对口服液中盐附子、党参、黄芪和麦冬各药味进行定性鉴别。 采用HSG254薄层板，正己烷-乙酸乙酯-甲醇(6.4∶3.6∶1)溶液作展开剂，氨蒸汽饱和20min后进行展开，碘化铋钾试液显色，检视，结果显示在对照品乌头碱、新乌头碱和次乌头碱色谱对应的位置上，盐附子对照药材和复方附子口服液均有相同红棕色斑点显示，而阴性样品在相应位置则没有斑点显示。 采用HSG薄层板，三氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶2)的下层溶液作展开剂，预饱和30min后进行展开，喷10％硫酸乙醇溶液，加热(105℃)至斑点清晰显色，日光下检测。结果显示在对照品黄芪甲苷色谱对应的位置上，黄芪对照药材和复方附子口服液均有相同的棕褐色斑点，而阴性样品在相应位置则没有斑点显示。 采用HSG薄层板，三氯甲烷-甲醇-水(13∶6∶2)的下层溶液作展开剂，预饱和30min后进行展开，喷10％硫酸乙醇溶液，加热(105℃)至斑点清晰显色，日光下检测。结果显示在对照品党参炔苷色谱对应的位置上，党参对照药材和复方附子口服液均有相同棕褐色斑点显示，而阴性样品在相应位置则没有斑点显示。 采用HSG254薄层板，甲苯-甲醇-冰醋酸(80∶5∶0.1)作展开剂，展开后254nm紫外灯下进行结果检视。在麦冬对照药材色谱对应的位置上，复方附子口服液有相同暗褐色斑点显示，而阴性对照品在相应位置则没有斑点显示。 结果： 1.复方附子口服液多成分含量测定 分别采用HPLC-CAD、LC-MS/MS二种检测方法对复方附子口服液中的多成分进行了含量检测。 以Capcell PAK C18MG色谱柱(5μm，4.6mm×250mm);乙腈和水作为流动相，1mL·min-1的流速，梯度洗脱，10Hz的检测频率;雾化温度35℃，HPLC-CAD法分析测定复方附子口服液中黄芪甲苷、麦冬皂苷D。黄芪甲苷、麦冬皂苷D线性范围分别为0.670～8.375μg，0.1388～1.735μg;加样回收率分别为97.56％(RSD为1.6％)、96.79％(RSD为1.9％)。方法具有较强的专属性，重复性及线性关系、加样回收率等符合定量要求，检测结果准确可靠。三批口服液中黄芪甲苷和麦冬皂苷D的含量在0.317～0.325mg mL-1、8.25～8.32μg.mL-1之间。 采用Agilent SB-C18(2.1mm×50mm，1.8μm)色谱柱;25℃柱温;0.05％甲酸水溶液和0.05％甲酸甲醇溶液作流动相，梯度洗脱;流速为0.3mL min-1;进样量2μL;电喷雾离子源(ESI)，正、负离子扫描方式，多反应监测扫描模式进行定量分析。LC-MS/MS法测定复方附子口服液中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰新乌头碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、黄芪甲苷、党参炔苷和麦冬皂苷D的含量，以小檗碱作为正离子扫描下的内标，芬布芬作为负离子扫描下的内标。10种成分线性范围依次为0.0194～0.9700μgmL-1、0.0186～0.9300μgmL-1、0.0182～0.9100μgmL-1、0.1608～8.040μgmL-1、0.1816～9.080μg·mL-1、0.1392～6.960μg·mL-1、0.0360～1.800μg·mL-1、0.0828～4.140μgmL-1、0.0258～1.290μgmL-1、0.0198～0.9900μg·mL-1;10种成分加样回收率依次为95.24％(RSD为3.4％)、102.0％(RSD为2.3％)、104.1％(RSD为3.1％)、103.7％(RSD为2.6％)、97.42％(RSD为2.2％)、98.46％(RSD为1.8％)、102.8％(RSD为2.5％)、101.3％(RSD为3.7％)、96.21％(RSD为3.8％)、101.9％(RSD为4.2％)。方法专属性强，线性关系、重复性、稳定性、精密度等符合定量检测要求，检测结果准确可靠，六批口服液中10种成分含量依次在0～2.05μg mL-1、6.28～6.89μg mL-1、1.87～2.04μg mL-1、175～181μgmL-1、117～122μg mL-1、286～320μg·mL-1、68.4～75.3μg mL-1、285～325μg·mL-1、46.4～49.6μg mL-1、6.96～8.31μg·mL-1之间。 2.复方附子口服液多成分的血药浓度测定 SD大鼠灌服复方附子口服液，给药后于0.083h，0.3h，0.5h，1h，2h，4h，8h，12h，24h时间点眼眶后静脉丛取血。 采用Agilent SB-C18(2.1mm×50mm，1.8μm)色谱柱;25℃柱温;0.05％甲酸水溶液和0.05％甲酸甲醇溶液作流动相，梯度洗脱;流速为0.4mL·min-1;进样量5μL;电喷雾离子源(ESI)，正离子扫描方式，多反应监测扫描模式进行定量分析。LC-MS/MS法测定血浆中苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰新乌头碱、次乌头碱、新乌头碱、黄芪甲苷等6种活性成分的变化，小檗碱为内标。6种成分线性范围依次为2.828～1448ngmL-1、5.125～2624ngmL-1、5.655～2895ngmL-1、5.080～2600ng·mL-1、2.585～1324ngmL-1、6.925～3546ngmL-1，方法具有较高的专属性和灵敏度，各组分提取回收率＞70％，基质效应结果在80％～120％，无明显的基质效应，线性关系、精密度、准确度、稳定性等满足生物样本定量检测要求。苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱及黄芪甲苷达峰时间均在18分钟，苯甲酰乌头碱达峰时间在半小时。在实验检测条件下，4小时后血样中未检出黄芪甲苷，24小时后血样中未检出苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱和苯甲酰新乌头碱。 结论： 所建立的TLC方法斑点清晰，分离效果好、阴性样品没有干扰，可用于鉴别本制剂中的盐附子、黄芪、党参和麦冬。HPLC-CAD法测定口服液中黄芪甲苷及麦冬皂苷D，避免了这类成分紫外末端吸收、检测难的困境。建立的LC-MS/MS法测定口服液中多成分及血药浓度，方法灵敏、快速。以上研究工作为该制剂的质量和安全性管控提供了有效的科学方法。