论文部分内容阅读
目的： 通过培养类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)患者的滑膜细胞以及购买的成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes，FLS），比较两者的不同，选取更适合后续实验的细胞;实验观察(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇((5 R)-5-hydroxytriptoli，雷藤舒，LLDT-8）对TNF-α联合IL-17诱导的RA-FLS表达趋化因子GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α、RANTES的影响，探讨LLDT-8对RA-FLS的抗炎作用;研究LLDT-8对抑瘤素M(oncostatin-M，OSM)诱导RA-FLS的JAK/STAT信号通路的影响，为LLDT-8运用于临床提供科学依据。 方法： 1.在无菌条件下取类风湿关节炎患者的滑膜组织，分离纯化得到滑膜细胞，复苏购买的成纤维样滑膜细胞，传代后采用倒置显微镜观察细胞，流式细胞技术表面标记抗体鉴定，比较两者的不同。实验中选取的都为处于对数生长期的细胞; 2.ELISA法检测RA-FLS上清液中GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α、RANTES的浓度，RT-PCR法检测RA-FLS中GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α、RANTESmRNA的表达; 3.ELISA法检测RA-FLS上清液中IL-6的浓度，RT-PCR法检测RA-FLS中IL-6mRNA的表达，Western Blot法检测RA-FLS中p-JAK1、p-JAK2、 p-STAT1、p-STAT3的表达。 结果： 1.流式细胞术检测RA病人FLS CD90阳性表达率为90.87±0.31％，RA-FLS CD90阳性表达率为100％; 2.LLDT-8对TNF-α联合IL-17诱导RA-FLS的GRO-α、ENA-78、MCP-1、MIP-1α、RANTES的影响 2.1 ELISA结果显示:LLDT-8低、中、高浓度组GRO-α浓度低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.001);LLDT-8低、中浓度组ENA-78浓度低于TNF-α联合IL-17组，差异无统计学意义(P＞0.05)，LLDT-8高浓度组ENA-78浓度低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.001);LLDT-8低浓度组MCP-1浓度低于TNF-α联合IL-17组，差异无统计学意义(P＞0.05)，LLDT-8中、高浓度组MCP-1浓度低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.001);LLDT-8低浓度组MIP-1α浓度低于TNF-α联合IL-17组，差异无统计学意义(P＞0.05)，LLDT-8中、高浓度组MIP-1α浓度低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.01);LLDT-8低浓度组RANTES浓度低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.05)，LLDT-8中、高浓度组RANTES浓度低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.001); 2.2 RT-PCR结果显示:LLDT-8低浓度组GRO-α mRNA低于TNF-α联合IL-17组，差异无统计学意义(P＞0.05)，LLDT-8中、高浓度组GRO-α mRNA低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.001);LLDT-8低、中、高浓度组ENA-78mRNA低于TNF-α联合IL-17组，差异无统计学意义(P＞0.05);LLDT-8低浓度组MCP-1 mRNA低于TNF-α联合IL-17组，差异无统计学意义(P＞0.05)，LLDT-8中、高浓度组MCP-1 mRNA低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.001);LLDT-8低、高浓度组MIP-1αmRNA低于TNF-α联合IL-17组，差异无统计学意义(P＞0.05)，LLDT-8中浓度组MIP-1αmRNA低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.05);LLDT-8低浓度组RANTES mRNA低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.05)，LLDT-8中、高浓度组RANTES mRNA低于TNF-α联合IL-17组，差异有统计学意义(P＜0.001); 3.LLDT-8对OSM诱导RA-FLS的JAK/STAT信号通路的影响 3.1 Western Blot结果显示:LLDT-8可抑制OSM诱导的RA-FLS的p-JAK2、p-STAT3的蛋白表达; 3.2 ELISA结果显示:LLDT-8低浓度组IL-6浓度低于OSM组，差异无统计学意义(P＞0.05)，LLDT-8中、高浓度组IL-6浓度低于OSM组，差异有统计学意义(P＜0.01); 3.3 RT-PCR结果显示:LLDT-8低、中、高浓度组IL-6 mRNA低于OSM组，差异有统计学意义(P＜0.001)。 结论： 1.RA-FLS表面标记抗体CD90阳性百分率高于病人滑膜细胞CD90的表达，两者均为成纤维样滑膜细胞; 2.LLDT-8可抑制TNF-α联合IL-17诱导RA-FLS的GRO-α、MCP-1、MIP-1α、RANTES的表达，达到抗RA-FLS炎症作用; 3.LLDT-8可抑制OSM诱导RA-FLS p-JAK2、p-STAT3的表达调控JAK/STAT信号通路，进而抑制IL-6的表达。