论文部分内容阅读
基因组印记(genomicimprinting)是等位基因依赖双亲性别表达的不符合孟德尔遗传定律的特殊遗传现象。目前已知的大多数印记基因都是与生长发育和分化有关的基因。由于印记基因是父源或母源等位基因表达，基因表达产物量在影响该基因生长发育和分化等功能方面有重要意义。本研究运用遗传标记的识别、RT-PCR、实时荧光定量PCR等技术对猪印记基因(IGF2、H19、IGF2R、IPL)进行了研究，主要包括印记基因多态性与繁殖性状的关系和印记基因mRNA水平表达差异等方面进行了研究，为猪繁殖性状的研究提供一些有益的帮助。主要研究结果如下：
1、用PCR-SSCP方法对母猪和仔猪IGF2外显子2第41个碱基处(5’→3’)SNP(G→A)位点进行基因型分析，发现在母猪中AA型为97．94％，AG型为2．06％，GG型为0，在母猪当胎仔猪窝初生重、窝胎盘重、窝胎盘效率、窝产仔总数、窝产活仔数5个性状中AA型、AG型差异不显著：仔猪中AA型占85．96％、AG型占14．04％、GG型占0％，在仔猪其初生重、胎盘重、胎盘效率3个性状中AA型、AG型差异不显著。
2、用PCR-PAGE法对母猪和仔猪IGF2外显子9第1067．1090个碱基处(5’→3’)的微卫星多态(CA)n位点进行基因型分析，发现在母猪中AA型为37．08％，AB型为39．33％，BB型为23．59％，在母猪当胎仔猪窝初生重、窝胎盘重、窝产仔总数、窝产活仔数和窝胎盘效率5性状AA型、BB型、AB型差异不显著；在仔猪中AA型占33．33％、AB型占44．44％、BB型占22．23％，仔猪其初生重、胎盘重和胎盘效率3性状AA型、BB型、AB型差异不显著。
3、用PCR-SSCP方法对母猪、仔猪H19外显子5第233个碱基处(5→3’)SNP(C→T)位点进行基因型分析，发现母猪TT型占0、TC型占2．38％、CC型占97．62％％，在母猪当胎仔猪窝初生重、窝产仔总数、窝产活仔数和窝胎盘效率4性状CC型、TC型差异不显著，窝胎盘重CC型显著高于TC型(p<0．05)；仔猪TT型占2．15％、TC型占10．73％、CC型占87．12％，仔猪其初生重、胎盘重和胎盘效率3性状CC型、TC型、TT型差异不显著。
4、用SYBRGreenI实时荧光定量PCR技术检测了父方表达印记基因IGF2在长白和杜洛克仔猪不同性状中的差异表达。发现杜洛克仔猪IGF2外显子2猪尾mRNA表达量初生重重组显著高于初生重轻组、胎盘重重组显著高于胎盘重轻组(p<0．05)，长白仔猪IGF2外显子2胎盘mRNA表达量胎盘重重组极显著高于胎盘重轻组(p<0．01)，长白仔猪IGF2外显子2和外显子9猪尾mRNA表达量初生重重组显著高于初生重轻组(p<0．05)，长白仔猪IGF2外显子9胎盘mRNA表达量胎盘重重组显著高于胎盘重轻组(p<0．05)，杜洛克仔猪IGF2外显子2和外显子9胎盘mRNA表达量以初生重、胎盘重和胎盘效率性状分组，组间差异不显著(o>0．05)，杜洛克仔猪IGF2外显子2和外显子9猪尾mRNA表达量以胎盘效率性状分组，组间差异不显著@>0．05)，杜洛克仔猪IGF2外显子9猪尾mRNA表达量以初生重、胎盘重性状分组，组间差异不显著(p>0．05)，长白仔猪IGF2外显子2和外显子9胎盘mRNA表达量以初生重和胎盘重性状分组，组间差异不显著(p>0．05)，长白仔猪IGF2外显子2和外显子9猪尾mRNA表达量以胎盘重和胎盘效率性状分组，组间差异不显著(p>0．05)。
5、用SYBRGreenI实时荧光定量PCR技术检测了母方表达印记基因H19在长白和杜洛克仔猪不同性状中的差异表达。发现杜洛克仔猪、长白仔猪H19外显子5仔猪胎盘mRNA、猪尾mRNA表达量以初生重、胎盘重和胎盘效率性状分组，组间差异不显著(p>0．05)。
6、用SYBRGreenI实时荧光定量PCR技术检测了母方表达印记基因IGF2R在长白和杜洛克仔猪不同性状中的差异表达。发现杜洛克仔猪、长白仔猪IGF2R仔猪胎盘mRNA、猪尾mRNA表达量以初生重、胎盘重和胎盘效率性状分组，组间差异不显著(p>0．05)。
7、用SYBRGreenI实时荧光定量PCR技术检测了母方表达印记基因IPL在长白和杜洛克仔猪不同性状中的差异表达。发现杜洛克仔猪胎盘IPLmRNA表达量初生重重组显著高于初生重轻组、胎盘重重组显著高于胎盘重轻组(p<0．05)，长白仔猪胎盘IPLmRNA表达量初生重重组显著高于初生重轻组(p<0．05)、胎盘重重组极显著高于胎盘重轻组(P<0．01)，杜洛克和长白仔猪胎盘IPLmRNA表达量以胎盘效率性状分组，组间差异不显著(p>0．05)，杜洛克和长白仔猪猪尾IPLmRNA表达量以初生重、胎盘重和胎盘效率性状分组，组间差异不显著(p>0．05)。
本文通过对猪印记基因的研究，探索了长白猪、杜洛克猪IGF2、H19多态与性状的关系以及长白仔猪、杜洛克仔猪印记基因(IGF2、H19、IGF2R、IPL)在胎盘、猪尾中的表达情况。