论文部分内容阅读
三磷酸腺苷(ATP)和其水解化合物(ADP、AMP)在动物和植物体研究中应用价值突显，广泛用于临床医学研究、食品等领域。目前国内外对ATP的各种提取、检测方法以及应用实例研究很多，其中很大部分涉及动物体研究，植物中磷酸腺苷含量分析至今鲜有报导。而ATP对植物，特别是烟草的遗传育种、生长发育、质量控制等方面起着重要作用，其地位重要程度显而易见。 论文首先分析了现有分析方法并归纳总结了各种检测方法的优缺点，其中涉及国内外ATP最新检测技术，指出在相当一段时间内利用高效液相色谱技术检测ATP仍然是主流，为日后进一步开发出更准确、方便快捷的检测方法奠定基础;其次，建立了苯酚提取—超高效液相色谱法(UPLC)同时测定新鲜烟叶中3种磷酸腺苷(ATP、ADP和AMP)的分析方法。烟叶样品经过苯酚(Phenol-TEA)提取，纯化后，采用磷酸盐缓冲液作为流动相洗脱，经ACQUITY BEH-C18色谱柱分离，在259nm波长对样品进行检测。该方法可快速、准确检测烟叶样品中ATP含量，进而为研究烟草能量代谢尤其不育系的产生机理，提供重要的检测指标;再次，目标方法用于一些新鲜烟叶样品的分析，为深入地了解磷酸腺苷对烟草遗传育种，以及对生长发育的影响提供重要的方法依据;最后展望能运用各种研究方法和手段为ATP的检测开发出高效稳定的检测技术方法。 研究表明，低温下以苯酚提取样品中磷酸腺苷效果佳，并且提取液中的ATP、ADP和AMP较稳定，不易水解，样品在2h以内各磷酸腺苷变化率小于10％。通过C18色谱柱，经过梯度优化，无论采用磷酸盐缓冲液还是三乙胺缓冲液为流动相均能达到良好分离效果。使用三乙胺缓冲液流动相分离效率高，而使用磷酸盐缓冲液具有检测灵敏的优点。线性范围(1～100)μg/mL内，磷酸腺苷浓度与峰面积具有很好的相关系数(r＞0.9999)，3种磷酸腺苷检测限分别为0.51μg/g、0.52μg/g、0.70μg/g，回收率在90.51％～104.38％之间，相对标准偏差RSD在1.53％～3.67％之间。表明方法具有良好准确性和精密度。 对同一品种烟株中不同部位的磷酸腺苷含量作方差统计分析，其分布不存在差异，且不同部位磷酸腺苷物质水平由高到低总体表现为中部＞上部＞下部＞花的趋势;分别对不同品种烟株中各部位间ATP、ADP和AMP含量作方差统计分析，分析结果表明各品种部位间3种磷酸腺苷分布不存在差异，总体看来，叶中磷酸腺苷物质总含量由高到低表现为ATP＞ADP＞AMP的趋势，花中磷酸腺苷物质含量则表现为ATP＞AMP＞ADP;另外，通过方差统计分析发现，保持系和不育系烟株间显示为极显著差异水平。为了深入了解烟草中保持系与不育系之间磷酸腺苷的联系，对各水平统计数据进行两两比较，结果显示两种通过不同处理的不育系品种间ATP和AMP分布不存在差异，而ADP则显示为显著差异水平(p＜0.05)，此结果恰恰说明，烟草不育系之间磷酸腺苷分布呈规律性。最后，所探究的4个品种烟株中平均能荷值范围从0.493到0.627不等，而下部、中部、上部、花中平均能荷值分别为0.583、0.585、0.582、0.571，各部位能荷水平较接近。这些相关性分析为烟草育种提供指导作用，并为品种选育提供有力的理论依据。